Cuantificacion De Proteinas

CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

VELAZQUEZ ORTIZ INDRA V.

¿CON QUÉ MÉTODOS PUEDO CUANTIFICAR
PROTEÍNA?
Los métodos principales son:
UV 280
Biuret
Lowry
Bradford

LEY DE LAMBERT-BEER
la ley explica quehay una relación exponencial entre la
transmisión de luz a través de una sustancia y la
concentración de la sustancia, así como también entre la
transmisión y la longitud del cuerpo que la luzatraviesa.
Si conocemos Io y Is, la concentración de la sustancia
puede ser deducida a partir de la cantidad de luz
transmitida. Considérese un rayo de energía radiante con
una intensidad inicial Io que sehace pasar a través de una
celda de vidrio cuadrada contiendo una solución
homogénea de una sustancia que absorbe luz de cierta
longitud de onda. La intensidad de la energía radiante
transmitida Is esmenor a la intensidad inicial Io. debido
precisamente a que la solución fue capaz de absorber
cierta cantidad de energía radiante.

METODO UV
LAS PROTEÍNAS MUESTRAN UN FUERTE GRADO DE
ABSORCIÓN A280nm EN UV, PRINCIPALMENTE POR LOS
RESIDUOS DE TRIPTOFANO Y LA TIROSINA. YA QUE LAS
CONCENTRACIONES DE ESTOS AMINOÁCIDOS EN LAS
PROTEÍNAS ES FRANCAMENTE CONSTANTE SE PUEDE
UTILIZAR LA ABSORBANCIA A280nm PARA ESTIMAR LA
CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS

VENTAJAS
•MÉTODO RÁPIDO Y RELATIVAMENTE SENSIBLE (VARIAS
VECES MÁS SENSIBLE QUE EL MÉTODO DE BIURET)
•NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIO YOTRAS SALES BUFFER
•MÉTODO NO DESTRUCTIVO
•UTILIZADO EN DETECCIÓN POST-COLUMNA DE LAS
PROTEÍNAS

DESVENTAJAS
•LOS ÁCIDOS NUCLÉICOS TAMBIÉN ABSORBEN EN LA
REGIÓN DE 280nm
•EL CONTENIDO DE AMINOÁCIDOSAROMÁTICOS DIFIERE
CONSIDERABLEMENTE EN VARIAS PROTEÍNAS.
•LA SOLUCIÓN DEBE SER CLARA E INCOLORA. LA
TURBIDEZ PUEDE PRODUCIR RESULTADOS ERRÁTICOS
•SE REQUIERE UN SISTEMA RELATIVAMENTE PURO PARA
UTILIZARESTE MÉTODO

MÉTODO DE BIURET
El reactivo de Biuret se compone de hidróxido de sodio
y sulfato de cobre (solución alcalina fuerte), el grupo
amino de las proteínas reacciona con los iones del...