cultivo de fibroblastos de pollo




Instituto Politécnico Nacional

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Ingeniería Campus Guanajuato


Laboratorio de cultivos celulares



Práctica #5 CINÉTICA DE DESARROLLO DE UNA LÍNEA EN CULTIVO PRIMARIO CON EMBRIÓN DE POLLO





Integrantes:
Aviña Campos Sandra MarielaFalcón Campos Carolina
Flores Franco Nayelli
Ramos Hernández José David






OBJETIVOS
Objetivo General
Realizar un cultivo de embrión de pollo para desarrollar una cinética de crecimiento celular.
Objetivos Específicos
Hacer un cultivo de embrión de pollo evitando su contaminación.
Observar el crecimiento celular y estimar las diferentes concentraciones de células embrionarias de pollode los diferentes pases de cultivos, a través de la cámara de Neubauer.
Realizar la curva de cinética de crecimiento.


MATERIALES
Reactivos
Medio de cultivo DMEM enriquecido de la práctica anterior calentado a temperatura ambiente.
1.5 mL De colagenasa tipo III al 0.075%.
1.5 mL De tripsina al 0.15%.
2mL De solución PBS estéril.





Materiales
1 Embrión de pollo.
3 Cajas Petriestériles.
2 hojas de bisturí del No. 11 estériles.
Guantes, cubrebocas y gorro quirúrgico.
Sanitas o papel higiénico.
Piceta con etanol al 70%.
Pipeteador automático.
3 Pipetas estériles de 10 mL.
Puntas para micropipeta de 1000 μL.
Micropipeta de 100 a 1000 μL.
1 Tubo falcon de 15 mL estéril.
Gasas estériles.
Vortex.
Cinta adhesiva.
Papel aluminio.DIAGRAMA DE FLUJO EXPERIMENTAL
Embrión de pollo






OBSERVACIONES
En la práctica se realizaron pases de células que ya se encontraban a una densidad celular óptima para pasar a otra caja con medio.
El primer huevo que se tomó para verificar si había embrión salió falso, hasta el segundo huevo se pudo obtener el embrión el cual ya estaba formado y con plumas.
Se realizaron cambios en lametodología de la tripsinación y centrifugado para obtener el pelet de células, se modificó las cantidades de tripsina y de 3mL se agregaron 1.5mL en cada uno de los pasos respectivamente.
Para la centrifugación se realizaron dos centrifugaciones para lavar los trozos de tejido, en condiciones de 8 °C, 8000 rpm y por 8 min.
Los conteos de células iniciales se realizaron después de dos días.Para las sesiones dos y tres se realizaron los pases de células, pero sin realizar la criopreservación del 80%.
La temperatura que se tenía inicialmente en la estufa de secado fue de 37°C lo cual provoco que el crecimiento y adaptación de las células no se diera correctamente, lo cual provoco un cambio en la cinética de las células de pollo.
Se preparó más medio de cultivo, porque se terminó elmedio, teniendo una respuesta buena por las células al adaptarse a otro medio que no era el original preparado.
Observaciones generales
Se necesita tener más acceso al laboratorio, cuando en necesario realizar un pase si no hay un profesor no es posible entrar al laboratorio.
Tener en cuenta que los huevos si tienen que ser recién puestos por la gallina porque en varios equipos éstos se incubaronun día después.


RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Durante la práctica se hicieron diversas actividades, las cuales se muestran en la tabla I conforme a la fecha en que se realizaron.
Tabla I. Lista de actividades realizadas durante la práctica. Nótese que la práctica duró aproximadamente un mes.

Fecha
Actividad

2/Septiembre/13
Incubación de los huevos
17/Septiembre/13
Se llevó a cabo elcultivo inicial
23/Septiembre/13
Se realizó el primer pase del cultivo
27/Septiembre/13
Se realizó el segundo pase del cultivo
30/Septiembre/13
Se realizó el tercer pase del cultivo
4/Octubre/13
Se criopreservaron los fibroblastos de pollo


Cultivo inicial
Los principales factores que afectan al desarrollo de un embrión de pollo son la temperatura y la posición.
Tomando en cuenta...