cultivo in vitro

Resumen: A-011

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E
Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2004

Obtención múltiples yemas a partir de explantes foliares
de Arachis villosa (Leguminosae)
Fontana, María L. - Vidoz, María L. - Rey, Hebe Y. - Mroginski, Luis A.
Facultad de Ciencias Agrarias - IBONE - CC 209, Sgto. Cabral 2131, Corrientes (3400), Argentina.
E-mail: mlvidoz@agr.unne.edu.ar.Trabajo subsidiado parcialmente por el CONICET y por la SGCyT (UNNE)

Antecedentes
El género Arachis es de origen sudamericano y posee 69 especies, de las cuales alrededor del 80% crece en
Brasil y Argentina (Krapovickas & Gregory, 1994). El maní cultivado (A. hypogaea L.) es la especie más importante
como productora de granos. Su mejoramiento genético requiere la incorporación de caracteresagronómicamente
deseables como resistencia a sequías, heladas o diferentes agentes patógenos, mayor fijación de N2 y mayor producción.
Estos genes de interés se encuentran presentes en algunas especies silvestres del género Arachis, lo que demuestra la
importancia de colectar y conservar la mayor variabilidad posible de estos recursos genéticos en los bancos de
germoplasma. Una de lasherramientas más valiosas para hacer posible el mejoramiento genético y el aumento de la
variabilidad es la obtención de plantas enteras regeneradas a partir del cultivo in vitro de tejidos.
Arachis villosa (2n=2x=20) es una leguminosa perenne que vive en dunas y suelos arenosos, pero actualmente es
conocida sólo en Argentina y Uruguay pese a ser una especie de interés forrajero. Fue cruzada conespecies de la
sección Arachis, dando como resultado híbridos altamente estériles (Gregory & Gregory, 1979).
Si bien existe una abundante literatura sobre la regeneración in vitro de plantas de especies del género Arachis
(Griga, 1999; Hammatt et al., 1986; Lakshmanan & Taji, 2000; Mroginski &, Kartha, 1984), con A. villosa sólo fue
reportado un trabajo acerca de la regeneración de unas pocasplantas a partir de anteras y granos de polen (Bajaj et al.,
1981).
El objetivo de este trabajo fue lograr la regeneración in vitro de plantas de Arachis villosa a través del cultivo in
vitro de explantes foliares.
Materiales y Métodos
Se trabajó con plantas de Arachis villosa procedentes de tres accesiones (¨Millot¨, S2867 y S2866) que crecen en
macetas en el jardín del IBONE. Los explantesempleados fueron porciones de folíolos de 3 mm2, provenientes de la
primer hoja desplegada, los que fueron desinfestados mediante inmersión en alcohol 70o durante 30 segundos y luego
sumergidos en una solución de lavandina al 15% (conteniendo 55 g de cloro activo) durante 12 minutos. Posteriormente
se realizaron 3 lavados con agua destilada estéril.
Los explantes fueron cultivados en tubos devidrio de 11 cm3 conteniendo 3 cm3 de medio de cultivo. Los tubos
fueron obturados con Resinite AF 50 e incubados en cámara a 27±2°C, con un fotoperíodo de 14 horas y una intensidad
lumínica de 116 µm/seg/m2. Se utilizó el medio basal de Murashige y Skoog (1962) (MS), el cual fue suplementado con
diferentes concentraciones y combinaciones de bencilaminopurina (BAP) y Thidiazurón (TDZ). El pH de losmedios
fue ajustado a 5,8 antes de la adición de 0,7% de agar. Los medios de cultivo fueron esterilizados en autoclave a 0,101
MPa durante 20 minutos.
Resultados y discusión
Al cabo de 90 días del cultivo in vitro de explantes foliares en medios conteniendo TDZ o BAP solos o
combinados entre sí, la formación de callos fue la única respuesta obtenida, no observándose la formación de yemas(Fig. 1). Sin embargo, a los 30 días del subcultivo de estos callos en el mismo medio en que fueron originados, se
obtuvieron yemas en porcentajes de hasta el 100 % (Fig. 2), lo que permite reconocer el efecto organogénico de
determinadas concentraciones de TDZ en A. villosa. Resultados semejantes fueron reportados en cultivos de A.
hypogaea, en los que explantes derivados de plántulas de 8...