cultivos vegetales II

PRACTICAS
DE
BIOTECNOLOGÍA VEGETAL

INDICE
1. MICROPROPAGACIÓN
1.1.
Medios de cultivo.
1.1.1.
Medio de Cultivo de Murashige y Skoog .
1.1.1.1.
Elaboración de Soluciones Madre del medio de cultivo Murashige y Skoog.
1.1.1.2.
Preparación del medio de cultivo Murashige y Skoog.
1.1.2.
Otros medios de cultivo.
1.2.
Establecimiento in vitro.
1.2.1
Asepsia superficial de material vegetal.
1.3.Proliferación
1.3.1.

Desarrollo de material vegetal in vitro

1.4.

Enraizamiento in vitro

1.5.

Aclimatación

2. CULTIVO DE MERISTEMOS
2.1. Microinjerto
3. CULTIVO DE CALLO
4. SUSPENSIONES CELULARES
4.1.
Viabilidad de células aisladas
5. EMBIOGÉNESIS SOMATICA
6. SEMILLAS ARTIFICIALES
6.1 Encapsulación en gel de alginato
7. MICORRIZACIÓN CONTROLADA IN VITRO
7.1.
Aislamiento y cultivo de hongosmicorrícicos
7.2.
Plantas micropropagadas
7.3.
Inoculación de plantas micropropagadas con hongos ectomicorrícicos
8. BIBLIOGAFÍA

2

1.- MICROPROPAGACIÓN
El cultivo in vitro permite el crecimiento y desarrollo de material vegetal en
recipientes que lo separan del ambiente exterior y lo mantienen en condiciones controladas
y asépticas. Entre las diversas técnicas de cultivo in vitro, la micropropagaciónconsiste en
la producción clonal de vegetales a partir, generalmente, de ápices o explantos nodales de
una planta madre. La gran producción de nuevas plantas se ve favorecida gracias al rápido
crecimiento del material vegetal in vitro y a la proliferación de tallos durante los
subcultivos.
Un programa de micropropagación puede comprender las siguientes etapas:
Etapa 0: Selección y acondicionamientode la planta madre
Etapa I: tratamientos de asepsia y establecimiento del cultivo mediante
Etapa II: Desarrollo y multiplicación de los brotes
Etapa III: enraizamiento o acondicionamiento de los brotes para su
aclimatación a condiciones ex vitro.
Etapa IV: Aclimatación a condiciones ex vitro.
E0
E1
E1

E2

E3

E4

Planta madre
Asepsia
Establecimiento del cultivo in vitro

ProliferaciónEnraizamiento / Acondicionamiento

Aclimatación

3

1.1.- MEDIOS DE CULTIVO
Antes de realizar la asepsia del material vegetal que se va a introducir in vitro, es
necesario disponer de Medios de Cultivo esterilizados y dosificados en recipientes
adecuados. Una parte importante del cultivo in vitro son los Medios de Cultivo ya que en
ellos se encuentran las sustancias necesarias para el crecimiento ydesarrollo de los tejidos
vegetales. Un medio de cultivo es una solución acuosa en donde se encuentran disueltas
sales minerales que aportan los elementos esenciales Macronutrientes (N, P, K, S. Ca y Mg)
y Micronutrientes (Fe, B, Mn, Zn, Cu, Mo, y Co). Normalmente es imprescindible una fuente
de carbono, generalmente la sacarosa, debido a la escasa actividad fotosintética de los
tejido in vitro. Además,el medio puede ser enriquecido con Aminoácidos, Vitaminas y
Reguladores del Crecimiento.
Los medios de cultivo se preparan a partir de soluciones concentradas 10 o 100 veces
(Soluciones Madre o Stock). En la solución madre se pueden mezclar varias sales minerales
siempre que no se produzcan problemas de precipitación. Algunos elementos, como el Fe,
se utilizan en forma de quelatos para mantener sudisponibilidad durante el cultivo.
Los medios de cultivo se pueden utilizar de forma líquida o con un agente gelificante
como el agar.

1.1.1.-MEDIO DE CULTIVO DE MURASHIGE Y SKOOG.
El Medio de Cultivo MS (Murashige y Skoog, 1962) se realiza con las siguientes
sustancias:
Macronutrientes
mg/L
(NH4 )NO3

1650

MgSO4.7H2O

370

KNO3

1900

KH2PO4

170

CaCl2.2H2O

440

4

MicronutrientesVitaminas
mg/L

mg/L

FeSO4.7H2O

27,8

myo- Inositol

100

Na2EDTA

37,3

Tiamina HCl

0,1

Acido nicotínico

0,5

H3BO3

6,2

Glicina

2, 0

MnSO4.4H2O

22,3

Piridoxina HCl

0,5

ZnSO4.7H2O

8,6

Na2MoO4.2H2O

0,25

CuSO4.5H2O

0,025

CoCl2.6H2O

0,025

Sacarosa

30

KI

0,83

Agar

7.5

g/L

1.1.1.1.- ELABORACIÓN DE SOLUCIONES MADRE DEL MEDIO DE CULTIVO MURASHIGE Y SKOOG
Para la realización del...