Demostración De La Actividadoxidoreductasa

DEMOSTRACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE UNA OXIDOREDUCTA . SA

I. INTRODUCCIÓN
Los enzimas son catalizadores muy potentes y eficaces, químicamente son proteínas Como catalizadores, los enzimas actúan en pequeñacantidad y se recuperan indefinidamente. No llevan a cabo reacciones que sean energéticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios químicos, sino que aceleran su consecución.
Las enzimas son grandes proteínas que aceleran las reacciones químicas. En su estructura globular, se entrelazan y se pliegan una o más cadenas polipeptídicas, que aportan un pequeño grupo de aminoácidos paraformar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el sustrato, y donde se realiza la reacción. Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si sus formas no encajan con exactitud. Como ya es conocido los organismos obtienen su energía a través de reacciones de oxidación reducción catalizadas por las oxidoreductasas y su capacidad de realizar una determinada reacción depende del potencial redox(Eh). Existen microorganismos que pueden desarrollarse en ambientes pobres o ricos en oxígeno, la presencia de mayores o menores concentraciones de oxigeno en un alimento indicaran si este es un medio oxidante o no, o lo que es lo mismo si posee valores altos o bajos de Eh respectivamente; de acuerdo con esto, los microorganismos se clasifican en:
* Aerobios estrictos: Crecen en presencia deoxigeno
Eh: + 350 a 500mv
* Anaerobios estrictos: Crecen en ausencia de oxigeno
Eh: - 150
* Aerobios facultativos: Crecen en presencia o ausencia de oxígeno
Eh: -350 a + 500mv
La determinación de los potenciales de oxido reducción en alimentos se realiza con electrodos apropiados y también se usan algunas sustancias que se van a colorearo decolorar a diferentes valores de Eh.
En está practica verificaremos la actividad de una enzima de óxido reducción, y luego estimaremos el numero de microorganismos presentes en un alimento mediante la prueba de la reductasa.
II. MATERIALES Y METODOS

1. Se mezclara cuidadosamente la muestra por inversión y agitación y se colocará 10 ml en un tubo de ensayo, cuidadosamente para quelos lados internos no se mojen de leche.
2. Luego se añade 1 ml de la solución de azúl de metilo evitando que la pipeta haga contacto con la muestra, ni con las paredes del tubo.
3. Enseguida tapar asépticamente el tubo con un tampón de goma, inviértalo 2 veces de tal manera que toda la columna de aire se eleve por encima de la leche.
4. Después de 5 minutos colocar el tubo de ensayo enel baño de agua a 37,5 + 0,5 0C, cuida que el agua se mantenga por encima del nivel de la leche en el tubo y que el interior del baño sea oscura.
5. A continuación se prepara 2 tubos control, uno que contenga 1 ml de agua corriente y 10 ml de leche. Ambos tubos control tienen que introducirse en agua hirviente por lo menos durante 3 minutos.
6. Se considera que la leche está en buen estadocuando no se decolora después de haberla incubado 30 minutos. Una leche decolorada es aquella que ha perdido el color en toda la columna hasta 5 mm de la superficie.

III. RESULTADOS

En el primer tubo de ensayo con azul de metilo con leche el color de la sustancia cambio esto es debido a que cuando el azul de metilo recibe protones cambia de color mejor dicho cuando se oxida y se reduce yesto es debido a los microorganismos presentes en el alimento en este caso la leche.



El segundo tubo de ensayo hervido de azul de metilo con leche no cambio de color esto debido a que al calentar la sustancia a una determinada temperatura hace que los microorganismos que están en el alimento terminen muriendo por que se les somete a una temperatura que estos organismos no...