determinació de glucèmia en sèrum

P.1 - DETERMINACIÓ GLUCÈMIA EN SÈRUM BASAL


OBJECTIU

Es tracta d'una tècnica que ens permet determinar la concentració de glucosa en una mostra de sèrum obtingut a partir d'una mostra de sang total presa en condicions basals. Utilitzarem els valors de glucosa obtinguts per a diagnosticar possibles hiperglucèmies o diabetis mellitus.

MÈTODE

Mètode enzimàtic GOD/POD amb glucosalíquida de QCA®.

Els enzims que hi intervenen són:
GOD: Glucosa oxidasa.
POD: Peroxidasa.

PRINCIPI DE LA TÈCNICA
Glucosa + O2 + H2O GOD ácido glucònico + H2O2
2H2O2 + 4-aminoantipirina + Àc. p-Hidroxibenzoic POD Derivat quinònic acolorit + 4H2O

La glucosa és oxidada per l'acció de la glucosa oxidasa, que és un enzim que només reacciona, donant lloc a H2O2. El H2O2 reacciona amb la4-aminoantipirina, gràcies a l'enzim peroxidasa, donant lloc a aminoantipirina oxidada.
L'aminoantipirina és el cromogen de la reacció. El derivat quinònic acolorit és l'aminoantipirina oxidada, que és la substància que dóna color (vermellós) a la solució i que és el que mesurem amb l'espectrofotòmetre.

La quantitat d'aminoantipirina oxidada és proporcional a la quantitat de peròxid d'hidrogen(H2O2) que, a la vegada, és proporcional a la quantitat de glucosa. Així, quan mesurem la concentració de l'aminoantipirina oxidada utilitzant l'espectrofotòmetre (mesurant-ne l'absorbància) estem fent una mesura indirecta de la concentració de la glucosa del sèrum.
El cromogen ens permet mesurar la glucosa pel mètode espectrofotomètric, que és una manera molt més simple de mesurar l'àcid glucònici, per tant, la glucosa, que altres mètodes existents.

QUÈ INCLOUEN ELS KITS DE LA TÈCNICA?

Els kits vénen amb:

1. Reactiu de treball ja llest per a ser utilitzat (1x100 ml, 3x100 ml o 4x250 ml, segons el kit). Les concentracions de la solució reactiva són:
a. Tampó fosfat de pH 6,8 (100 mM)
b. Àc. p-Hidroxibenzoic (39,5 mM)
c. 4-Aminoantipirina (0,8 mM)
d. Fenol (4,5 mM)
e.Glucosa oxidasa (≥18 kU/l)
f. Peroxidasa (≥1,1 kU/l)
Estabilitzants no reactius

2. Standard de glucosa de concentració coneguda ja llest per al seu ús (sigui quin sigui el kit, un envàs amb 5 ml de dissolució aquosa de glucosa de concentració 100 mg/dl = 5,55 mmol/l).

REACCIÓ

En aquesta tècnica volem mesurar la concentració de glucosa en sèrum.
Per a fer-ho utilitzem una tècnicaenzimàtica en la que intervenen dos enzims: el GOD (glucosa oxidasa) i el POD (peroxidasa).

El cromogen és la 4-Aminoantipirina, però la substància que dóna color és l'aminoantipirina oxidada, que dóna un color vermellós a la solució.
Les substàncies que afegim com a reactius són els dos enzims i el cromogen.

EN QUINES CONDICIONS S'HA DE GUARDAR EL KIT EN EL LABORATORI?

Refrigerat, entre2-8ºC. En aquestes condicions els components del kit són estables fins a la data de caducitat indicada a l'etiqueta.

EN QUIN ESTAT ESTAN PRESENTATS ELS REACTIUS DE TREBALL?

Es presenten en forma líquida i ja llestos per a ser usats, no necessiten preparació prèvia.

HI HA D'HAVER ALGUNA PRECAUCIÓ ESPECIAL AMB EL REACTIU DE TREBALL? PER QUÈ?

El reactiu conté Azida sòdica al 0,09% i s'ha demanipular amb precaució, perquè és tòxica i pot ser absorbida a través de la pell.
Els residus s'han d'eliminar al contenidor de tòxics, segons la normativa legal vigent.
És recomanable no pipetejar directament de l'ampolla de reactiu, per a evitar contaminacions no desitjades.

QUIN TIPUS DE MOSTRA S'UTILITZA I COM S'HA DE CONSERVAR?

La glucosa basal es determina en sèrum, plasma o LCR.La glucosa en sèrum o plasma (però no en sang total, a causa dels fenòmens glucolítics) es conserva un màxim de 2-3 dies refrigerat a 2-8ºC.

EXPLICA ELS DIFERENTS PASSOS DE LA TÈCNICA (TEMPS D'INCUBACIÓ, λ...)

Preparem 5 tubs: un per fer el blanc a l'espectrofotòmetre (BL), la mostra problema (PR), un tub amb l'estándar de concentració coneguda (ST) i dos tubs control (seriscan normal...