Determinación del sistema abo y rh.

Práctica 9. Determinación del Sistema ABO y RH.

Fundamento La determinación del grupo sanguíneo comprende dos partes: 1. Una prueba celular, para determinar los antígenos. 2. Una prueba sérica o grupo inverso, para la determinación de anticuerpos. Las dos pruebas se practican simultáneamente porque ellas se complementan y en esta forma una verifica los resultados de la otra. Hay casos en loscuales existen discrepancias entre ambas pruebas, lo cual requiere una investigación adicional para su resolución. Deben realizarse a temperatura ambiente (20 a 40°C) o menos; la incubación a 37°C debilita la reacción. La prueba inversa no se debe practicar en lámina, porque generalmente la concentración de anticuerpos no es lo suficientemente alta para causar la aglutinación de los glóbulos rojossin centrifugar. El grupo sanguíneo de una persona es clasificado como A, B, AB u O, dependiendo de la presencia o ausencia de los anticuerpos anti-A o anti-B en el suero. Recolección de la muestra: Extraer aproximadamente 5 mL de sangre sin anticoagulante. La hemólisis debida a venipuntura traumática o a mal conservación, invalida la muestra. Reactivos y materiales:       Solución salinafisiológica (NaCl 0,85 ó 0,9%). Sueros hemoclasificadores: Anti-A, anti-B y anti-D. Suspensión al 5% de glóbulos rojos de grupo sanguíneo A y B. Suspensión al 5% de glóbulos rojos del paciente. Centrífuga. Tubos de vidrio de 10 ó 12 x 75mm.

Preparación de las suspensiones de los glóbulos rojos A y B a) Obtener glóbulos rojos A y B de personas clasificadas previamente, preferiblemente Rho (D)negativo. b) Colocar una alícuota de glóbulos rojos de cada uno de los grupos en tubos de centrífuga previamente rotulados.

c) Agregar solución salina fisiológica (SSF) hasta aproximadamente 10 mL, mezclar y centrifugar a 2500 r.p.m. por 5 minutos. d) Descartar el sobrenadante con pipeta Pasteur y repetir la operación dos veces más. Después del tercer lavado, preparar una suspensión al 5% en SSF.Las células deben ser preparadas en el laboratorio el mismo día. Desarrollo de la prueba: a) Centrifugar la muestra a 2000 r.p.m. por 10 minutos. b) Separar el suero de los glóbulos rojos. El suero debe colocarse en otro tubo debidamente identificado. c) Colocar en un tubo aparte, identificando, una alícuota de los glóbulos rojos en estudio y lavarlos una vez con SSF a 2500 r.p.m. por 5 minutos.d) Eliminar el sobrenadante y preparar una suspensión celular al 5% en SSF. e) Seleccionar 5 tubos de 10 ó 12 x 75mm e identificarlos con marcador como A- B- D- Ā-
, respectivamente. f) Colocar en el tubo marcado A, una gota de suero anti-A; en el tubo B, una gota de suero anti-B y en el tubo D, una gota de suero anti-D. g) Agregar a los tres tubos, una gota de la suspensión de hematíes en estudioy mezclar. h) En los tubos marcados Ā y
(prueba sérica), colocar dos gotas del suero en estudio. i) Agregar una gota de suspensión de hematíes A al tubo marcado como Ā, y una gota de suspensión de hematíes B en el tubo rotulado como
. j) Mezclar. Si se desea potenciar la aglutinación, los dos tubos pueden incubarse durante 5 minutos a temperatura ambiente. k) Centrifugar los cinco tubos a 3400r.p.m. por 15 segundos o a 1000 r.p.m durante 1 minuto. l) Desprender el botón de células del fondo del tubo agitando suavemente; inclinarlo hasta la posición horizontal para apreciar aglutinación. m)Anotar inmediatamente, tubo en mano, los resultados de la investigación, cuantificada en cruces. Observación: En la prueba sérica, puede detectarse la presencia de hemólisis y/o aglutinación lo quedebe interpretarse como positivo. Escala para la lectura de la aglutinación

4+ Un botón sólido de eritrocitos, fondo claro. 3+ Un grumo grande y varios muy pequeños o varios grumos grandes, fondo claro. 2+ Varios grumos de tamaño mediano, fondo claro. 1+ Grumos pequeños y muchos eritrocitos libres, fondo turbio. ½+ Escasos grumos muy pequeños, como arenilla, fondo turbio. Hp Hemólisis...