Determinacion De Alfa Amino Terminal

Pract 1 DETERMINACION DEL GUPO ALFA AMINO

INTRODUCCION

INTRODUCCION
El Fluorodinitrobenceno (DNFB) se combina con la amina del aminoácido liberándose ácido fluorhídrico y se forma undinitrofenil aminoácido (DNP-aa).
Esta reacción se puede utilizar para establecer la identidad del aminoácido terminal de una proteína portadora del grupo amino libre y también es muy útil para conocer elnúmero exacto de cadenas que contiene una molécula de proteína puesto que la reacción solo se produce con grupos amino libres.
La proteína se hace reaccionar con 1-fluoro-2,4.dinitrobenceno (Reactivo deSanger), forma un producto estable con el grupo amino del extremo y marca la proteína. Después de hidrolizar con HCl 6M la proteína seleccionada, el aminoácido N-terminal se separa e identifica comosu derivado 2,4-dinitrofenilo; el resto de los aminoácidos de la mezcla de hidrólisis permanece sin modificación química.
En general, la determinación del aminoácido N-terminal consiste en:
*Dinitrofenilación del aminoácido N-terminal de la proteína
* Eliminación del DNFB que no reaccionó
* Hidrólisis de la DNP-proteína
* Identificación del residuo N-terminal por cromatografía enpapel
OBJETIVOS

OBJETIVO
* El alumno utilizará el método de sanger para identificar los aminoácidos que contienen el grupo alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina.RESULTADOS

DNP-derivados | Rf1 | Rf2 | DNP-Terminales | DNP-No terminales |
DNP-val | 0.333 | --- | Si | --- |
DNP-ala | 0.421 | --- | --- | Si |
DNP-glu | 0.284 | --- | --- | Si |
DNP-asp |0.273 | --- | --- | Si |
DNP-phe | 0.424 | --- | --- | Si |
DNFB | 0.593 | --- | --- | Si |
Problema | --- | 0.329 | DNP-val | Todos los demás |
DISCUSION

DISCUSION
En el método de Sanger,el fluorodinitribenceno (DNFB) reacciona con los grupos α-amino de los aminoácidos N-terminales bajo condiciones alcalinas, para formar un dinitrofenil-derivado (DNP) del aminoácido. La unión...