Dna 1

Protocolo QIAGEN

 
1. Pesar 100 mg de la muestra.
2. Añadirle 400 µl del tampón AP1, 4 µl de RNasa A (100 mg/ml) y 20 µl de proteinasa K. Mezclar vigorosamente.
3. Incubar la mezcla a 65ºC durante 2 horas.
4. Añadir 130µl del tamón AP2, mezclar bien e incubar 5 minutos en hielo.
5. Centrifugar durante 5 minutos a 13000 rpm.
6. Recoger el sobrenadante y pasarlo a un tubo-columna QIAshredder ycentrifugar durante 2 minutos a velocidad máxima.
7. Transferir el líquido que se ha filtrado al tubo de abajo a un tubo eppendorf nuevo, sin arrastrar ningún resto de precipitado (si lo hay).
8. Añadir 1,5 volúmenes de tampón AP3/E y mezclar inmediatamente mediante pipeteo.
9. Recoger 650 µl de esa mezcla, incluyendo cualquier precipitado que pueda haberse formado, a la columna DNeasy mini spin.Centrifugar durante 1 minuto a velocidad mayor a 8000 rpm (10000 rpm) y desechar el líquido filtrado.
10. Repetir el paso anterior con la muestra restante. Desechar el filtrado y el tubo colector.
11. Colocar la columna DNeasy en un tubo nuevo de recogida, añadir 500 µl de tampón AW y centrifugar durante 1 minuto a 10000 rpm. Desechar el filtrado y reutilizar el tubo para el siguiente paso.
12.Añadir 500 µl de tampón AW a la columna DNeasy y centrifugar durante 2 minutos a 13000 rpm para secar bien la membrana.
13. Transferir la columna DNeasy a un microtubo de 1,5 o de 2 ml y añadirle 100 µl de tampón AE precalentado a 65 ºC directamente en la membrana DNeasy. Incubar 5 minutos a temperatura ambiente y centrifugar durante 1 minuto a 10000 rpm.
14. Repetir el paso anterior.
15. Guardar lamuestra obtenida en congelación.
 

COMO EXTRAER ADN






Escrito por Julián Esteban Londoño   
RESUMEN

El presente informe, representa una actividad de extracción del ADN, que será de gran utilidad en muchas aplicaciones de la medicina. Ya que la medicina del futuro es la genética, y el estudio de la genética comienza analizando el genoma, es importante conocer diferentes métodos que nospermitan extraerlo para poderlo analizar.
Es objetivo de este informe:
Denotar los diferentes métodos disponibles para la extracción del DNA.
Ejemplificar un método que permitirá conocer como es que funciona la técnica en este tipo de procedimientos.
Aprender la metodología utilizada para la extracción del DNA.
Profundizar en la teoría para conocer algunos aspectos de aplicaciones clínicas y saberqué técnicas nos ofrecen mejor rendimiento.
Obtener DNA con un máximo grado de pureza, basado en la buena aplicación del método.
MARCO TEÓRICO
La molécula de ADN (que es la que se va a extraer en este laboratorio) está constituida por dos largas cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice. Las dos cadenas de nucleótidos que constituyen una molécula de ADN, se mantienen unidasentre sí porque se forman enlaces entre las bases nitrogenadas de ambas cadenas que quedan enfrentadas.
La unión de las bases se realiza mediante puentes de hidrógeno, y este apareamiento está condicionado químicamente de forma que la adenina (A) sólo se puede unir con la Timina (T) y la Guanina (G) con la Citosina (C).
La estructura de un determinado ADN está definida por la "secuencia" de lasbases nitrogenadas en la cadena de nucleótidos, residiendo precisamente en esta secuencia de bases la información genética del ADN. El orden en el que aparecen las cuatro bases a lo largo de una cadena en el ADN es, por tanto, crítico para la célula, ya que este orden es el que constituye las instrucciones del programa genético de los organismos.
Conocer esta secuencia de bases, es decir,secuenciar un ADN equivale a descifrar su mensaje genético.
La estructura en doble hélice del ADN, con el apareamiento de bases limitado ( A-T; G-C ), implica que el orden o secuencia de bases de una de las cadenas delimita automáticamente el orden de la otra, por eso se dice que las cadenas son complementarias. Una vez conocida la secuencia de las bases de una cadena, se deduce inmediatamente la...