Edman
Páginas: 3 (713 palabras)
Publicado: 29 de agosto de 2011
Degradación de Edman
En este proceso el péptido reacciona con fenil isotiocianato que se une selectivamente al primer aminoácido. A continuación se escinde con HF anhidro el aminoácido marcado,separándolo del resto selectivamente con un disolvente orgánico. Tras un tratamiento en medio ácido el compuesto resultante se determina cromatográficamente.
Por otro lado, la determinación del restoC-terminal, se puede realizar con Hidracina: este compuesto reacciona con todos los enlaces peptídicos del péptido, provocando la hidrólisis de los mismos y dando lugar a aminoacil-hidracinas contodos los aminoácidos excepto con el último (C-terminal), pudiendo separarse del resto fácilmente y determinarse con posterioridad su naturaleza.
Fragmentación por hidrólisis parcial es necesariaporque por lo general no pueden secuenciarse péptidos con más de 20 o 30 aminoácidos. Se realiza con reactivos selectivos (en la mayoría de los casos proteasas) que hidrolizan determinados enlacespeptídicos.
La tripsina hidroliza por la derecha de Arg, Lys
La quimo tripsina hidroliza por la derecha de Phe, Trp, Tyr
La pepsina hidroliza por la izquierda de Phe, Trp, Tyr
La termolisina hidrolizapor la izquierda de Val, Leu, Ile
El bromuro de cianógeno (BrCN) hidroliza por la derecha de la Met
La secuenciación. Entre los distintos métodos existentes, podemos citar la degradación deEdman, cuyo fundamento hemos visto en la determinación del extremo N-terminal. La aplicación continuada de varios ciclos de la degradación de Edman me permite la secuenciación de todo el péptido, siempreque este no tenga más de 20 o 30 aminoácidos.
No obstante los actúales requerimientos de secuenciación de gran cantidad de péptidos en poco tiempo, han dado origen al desarrollo de nuevos métodos desecuenciación de péptidos, desarrollados principalmente para afrontar proyectos como el del proteína humano. Entre estos métodos podemos citar el MALDI MS y el ESI MS, ambos basados en la...
En este proceso el péptido reacciona con fenil isotiocianato que se une selectivamente al primer aminoácido. A continuación se escinde con HF anhidro el aminoácido marcado,separándolo del resto selectivamente con un disolvente orgánico. Tras un tratamiento en medio ácido el compuesto resultante se determina cromatográficamente.
Por otro lado, la determinación del restoC-terminal, se puede realizar con Hidracina: este compuesto reacciona con todos los enlaces peptídicos del péptido, provocando la hidrólisis de los mismos y dando lugar a aminoacil-hidracinas contodos los aminoácidos excepto con el último (C-terminal), pudiendo separarse del resto fácilmente y determinarse con posterioridad su naturaleza.
Fragmentación por hidrólisis parcial es necesariaporque por lo general no pueden secuenciarse péptidos con más de 20 o 30 aminoácidos. Se realiza con reactivos selectivos (en la mayoría de los casos proteasas) que hidrolizan determinados enlacespeptídicos.
La tripsina hidroliza por la derecha de Arg, Lys
La quimo tripsina hidroliza por la derecha de Phe, Trp, Tyr
La pepsina hidroliza por la izquierda de Phe, Trp, Tyr
La termolisina hidrolizapor la izquierda de Val, Leu, Ile
El bromuro de cianógeno (BrCN) hidroliza por la derecha de la Met
La secuenciación. Entre los distintos métodos existentes, podemos citar la degradación deEdman, cuyo fundamento hemos visto en la determinación del extremo N-terminal. La aplicación continuada de varios ciclos de la degradación de Edman me permite la secuenciación de todo el péptido, siempreque este no tenga más de 20 o 30 aminoácidos.
No obstante los actúales requerimientos de secuenciación de gran cantidad de péptidos en poco tiempo, han dado origen al desarrollo de nuevos métodos desecuenciación de péptidos, desarrollados principalmente para afrontar proyectos como el del proteína humano. Entre estos métodos podemos citar el MALDI MS y el ESI MS, ambos basados en la...
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