Eficiencia de Columnas HPLC

1.- OBJETIVO El objetivo de este procedimiento es describir los pasos a seguir para realizar el control de eficiencia y la activacin de las columnas cromatogrficas utilizadas en la HPLC. 2.-FRECUENCIA Cada vez que ingrese una columna nueva. El ensayo se realizar cada 6 meses para columnas en uso y que hayan cumplido un mnimo de 1500 inyecciones. 3.- DESARROLLO Condiciones cromatogrficas FaseMvil Preparar una mezcla filtrada y desgasificada de Metanol Agua (60 40). Detector UV- 254 nm. Flujo 1 mL por minuto. Volumen de inyeccin 10 L. Temperatura de columna Ambiente. Preparacin desoluciones stock. Solucin de tolueno pesar con exactitud aproximadamente 7,8 g de Tolueno en un matraz de 100 mL diluir y llevar a volumen con fase mvil. Solucin de Acetona pesar con exactitud aproximadamente5,0 g de Acetona en un matraz de 25 mL diluir y llevar a volumen con fase mvil. Solucin de Inyeccin transferir 1 mL y 5 mL de solucin de tolueno y solucin de acetona a un matraz de 100 mL y llevar avolumen en un matraz con fase mvil. Concentracin 0.780 mg/mL y 0.780 mg/mL Inyectar al equipo 5 veces. La desviacin estndar relativa entre inyecciones no debe ser mayor al 1 . Parmetros Para columnasnuevas N de Platos tericos no menor a 10000. Factor de asimetra no mayor a 2,0. Resolucin no menor a 2 entre dos picos contiguos. Para columnas en uso N de Platos tericos no menor a 2000. Factor deasimetra no mayor a 2,0. Resolucin no menor a 2 entre dos picos contiguos. Archivo de resultados. Anotar los datos obtenidos en la planilla de Control y Activacin de Columnas Cromatogrficas Archivarlos cromatogramas Activacin de una columna nueva (solo se realizara en caso que indicara el proveedor que la columna no est activada) Colocar la columna cromatogrfica en el horno del equipo Bombearuna solucin de AguaMetanol (8020) de la siguiente manera Flujo 0,2 mL/min durante 15 minutos. Flujo 0,4 mL/min durante 15 minutos. Flujo 0,6 mL/min durante 15 minutos. Flujo 0,8 mL/min durante 15...