El ingeniero genetico

El ingeniero genético , en diferentes épocas , necesitarà preparar al menos tres tipos diferentes de ADN. En primer lugar, a menudo se requiere ADN celular total como una fuente de material de partida para obtener los genes pare ser clonados . ADN total de la célula de un cultivo de bacterias , de una planta, a partir de células de animales , o de cualquier otro tipo de oganismo que està siendoestudiado . Este consta de un ADN genómico del organismo junto con cualquier moléculas de ADN adicionales , tales como plásmidos , que están presentes .
El segundo tipo de ADN que se requiere es el ADN plásmido puro . La Preparación del plásmido de ADN de una bacteria de cultivo sigue los mismos pasos básicos como la purificación de ADN celular total , con la diferencia crucial de que en algúnmomento el ADN plásmido debe ser separado de la masa principal de ADN cromosómico también presente en la célula .
Finalmente , será necesario ADN de fago si un vector de clonación de fago se va a utilizar . El DNA del fago se prepara generalmente a partir de partículas de bacteriófago en lugar de células infectadas , lo que no hay problema con la contaminación de ADN bacteriano . Sin embargo ,se necesitan técnicas especiales para eliminar la cápside del fago. Una excepción es la forma replicativa de doble hebra de M13 , que se prepara a partir de las células E coli de la misma manera que un plasmido bacteriano.

3.1 PREEPARACION DE ADN CELULAR TOTAL
Los fundamentos de la preparación de ADN son lo mas fácilmente entendidos, primero considerando los mas simples tipos de procesos depurificacion de ADN, donde el total complemento de celula bacterial se requiere. Las modificaciones necesarias para plasmido y preparación de ADN fago pueden entonces ser descritas mas tarde.
El procedimiento para la preparación de adn total de un cultivo bacerial de células puede ser dividido en cuatro escenarios:
1.- un cultivo de bacterias es plantado y luego cosechado.
2.- Las células sonrotas para liberar sus contenidos.
3.-La célula extraída es tratada para remover todos los componentes a excepción del ADN.
4.-La solución de ADN resultante es concentrada.

3.1.1 SEMBRAR Y COSECHAR UN CULTIVO BACTERIOLÒGICO

La mayorìa de las bacterias puede ser sembrada sin mucha diicultad en un liquido medio ( caldo de cultivo). El cultivo medio tiene què proveer una mezcla balanceadade los nutrientes esenciales a concentraciones que permitirán que las bacterias crezcan y se dividan de manera eficiente. Dos típicas medias de crecimiento son detalladas en la tabla 3.1
M9 es un ejemplo de un medio definido en el cual todos los componentes son conocidos. Este medio contiene una mezcla de nutrientes para proveer elementos esenciales tales como nitrógeno, magnesio y calcio asicomo glucosa para suministro de carbono y energía.
En la práctica, hay que añadir factores de crecimiento adicionales tales como oligoelementos y vitaminas para M9 antes de que \ bacteriana apoyo vill crecimiento. Precisamente los que se necesitan suplementos depende de la especie de que se trate.
El segundo medio descrito en la Tabla 3.1 es bastante diferente. LuriaBertani (LB) es un mediocomplejo o no definido, lo que significa que no se conoce la identidad y cantidad exactas de sus componentes. Esto se debe a que dos de estos ingredientes, triptona y extracto de levadura, son complicadas mezclas de desconocidos compuestos químicos. Triptona suministra aminoàcidos y
péptidos pequeños, mientras que el extracto de levadura (una preparación seca de células parcialmente digestedyeast)proporciona los requerimientos de nitrógeno, junto con azúcares
y nutrientes orgánicos. Medios complejos, como LB no necesitan más complemento y apoyan el crecimiento de una amplia variedad de especies bacterianas.
Los medios definidos deben ser utilizados cuando el cultivo bacteriano tiene que ser cultivado
bajo condiciones controladas con precisión. Sin embargo, esto no es necesario...