Elaboraci n de frotis y coloraci n de Gram

Elaboración de frotis y coloración de Gram
A través de la historia el hombre ha tomado interés por las enfermedades que se presentaban a las cuales no les encontraban explicación o se atribuían a castigos de dioses. Hasta que el biólogo alemán Van Leeuwenhoek observo en una gota de agua un nuevo mundo de “partículas” pequeñas llamándolas animálculos, lo que hoy se conoce como microbios. Debido aesto, tomo auge la teoría de Friedrich Henle, que propone que las enfermedades son causadas por gérmenes.
El estudio de los microorganismos ha llevado a que se estructure una diferenciación y clasificación de estos. En esta ocasión se estudió una de las técnicas más comunes de diferenciación de las bacterias que se ha usado, la tinción de Gram, empleada en el área de laboratorio para hacer unaclasificación entre Gram positivas y Gram negativas.






















PROPOSITO
Elaborar un frotis aplicando las técnicas establecidas a partir de colonias obtenidas de un cultivo
Aplicar y desarrollar de forma adecuada una coloración de Gram
Observar muestras de microorganismo en preparaciones fijadas y coloreadas
Lograr apropiarse de las técnicas y procedimientos realizados, además, poderaplicarse en el curso.

























MARCO TEÓRICO

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celularbacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose bacterias Gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias Gram negativas a las que se visualizan de color rosa.






































MATERIALES

Colorantes para la tinción: cristal violeta, solución de lugol, alcohol-cetona, safranina
Cultivos de bacterias:Cocos y bacilos
Laminas portaobjetos
Laminas cubreobjetos
Solución salina







































PROCEDIMIENTOS

Obtención de la muestra: para llevar acabo la práctica con un palillo se tomó muestras de la superficie de los dientes, carrillo, así como paladar blando, raspando cuidadosamente se obtuvo la muestra.

Preparación del frotis fresco: se calentó el asa de inoculaciónhasta rojo vivo y así se esterilizó. En un porta objeto se adiciono una gota de solución salina, con el asa se adicionó la muestra sobre la gota, luego se cubrió con el cubre objeto la preparación se observó en el microscopio a 40x.
Preparación del frotis directo: en un portaobjeto se adiciono una gota de solución salina, en donde se depositó, la muestra que se tomó de un cultivo, luego seutilizó el asa y se extendió la muestra por todo el portaobjeto en forma de zigzag hasta que quedó completamente disuelto en la superficie de este. Se secó el frotis al medio ambiente. Posteriormente se fijó pasándolo tres veces a través de la llama con la muestra hacia arriba.
Tinción de Gram, durante el transcurso de la práctica se vertió el cristal violeta sobre el portaobjetos y se dejó actuarpor 1 minuto cuando se inició el proceso de tinción. Seguido de esto se enjuagó con agua corriente y se dejó escurrir. Luego se agregó la solución de lugol y se dejó actuar por 1 minuto, transcurrido esto se Escurrió la solución y se enjuago el portaobjetos con agua corriente, además se decoloró con alcohol-acetona por 5 segundos y se enjuagó con agua corriente, posterior a este procedimiento seagregó la solución de Safranina y se dejó actuar por 30 segundos, por último se enjuagó, se escurrió y se secó.
Una vez se terminó la preparación del frotis, se observó a través del microscopio con el objetivo 100x.
















RESULTADOS
Frotis fresco: se observó diferentes microorganismos, desde pequeñas levaduras (ver fig. 1) hasta grupos grandes de hongos (mohos. Ver fig. 2) mediante el...