elecetroforesis

ELECTROFORESIS DEL ADN EN GELES DE AGAROSA
La concentración e integridad del ADN extraído, así como el tamaño de distintos
fragmentos de ADN (por ejemplo, productos de PCR) pueden serverificadas mediante
electroforesis en geles de agarosa o poliacrilamida. La electroforesis consiste en la separación de
moléculas (proteínas, isoenzimas, ácidos nucleicos) a través de una matriz tamponada(agarosa,
acrilamida, almidón). La matriz funciona como un filtro, separando las moléculas en un campo
eléctrico, de acuerdo al tamaño y la carga neta que poseen. En el caso de los ácidosnucleicos, el
grupo fosfato es el responsable por la fuerte carga negativa en condiciones de pH neutro,
haciendo que los fragmentos migren hacia el polo positivo (ánodo) durante la electroforesis.
Laresolución y velocidad de separación de fragmentos de ADN por electroforesis son
reguladas a través de la concentración de agarosa (o acrilamida) en el gel y el voltaje aplicado
durante laelectroforesis. La agarosa funciona como un filtro en el que los fragmentos de menor
tamaño migran más rápidamente hacia el ánodo que aquellos de mayor tamaño. Al aumentar la
concentración de agarosa sedificulta el movimiento de los fragmentos a lo largo del gel,
permitiendo obtener una mayor resolución en los fragmentos de menor longitud. El incremento
del voltaje aumenta proporcionalmente lavelocidad de migración de los fragmentos en el gel.
Los ácidos nucleídos separados en geles de agarosa pueden visualizarse mediante tinción
con colorantes fluorescentes, lo cual permite evaluar suintegridad y estimar su concentración
mediante un análisis comparativo con patrones de concentración conocida. Los colorantes
fluorescentes actúan mediante inserción entre las pares de bases queconforman el ácido
nucleíco. El bromuro de etidio es ampliamente utilizado para la visualización de ADN y ARN. Sin
embargo, éste es un reactivo altamente tóxico, con propiedades mutagénicas, por lo...