Ensayo de un diseño de experimentos
El objetivo del presente trabajo fue evaluar la robustez del método CLAR-fase invertida, previamentevalidado, para separación y cuantificación de catequina y epicatequina. La robustez fue investigada por medio de un diseño central compuesto, las variables independientes fueron concentración de ácidoacético y proporciones iniciales de acetonitrilo y las variables dependientes fueran el tiempo de retención, el factor de capacidad y la resolución de ambos picos. El ensayo fue realizado utilizandouna columna C18 y ácido acético-acetonitrilo como fase móvil, sistema de elución gradual y detección UV en 280 nm. Todas las respuestas mostraron un comportamiento similar, excepto la resolución de laepicatequina, motivo por el cual elegímos este para la realización de este trabajo.
La proporción de acetonitrilo influenció todas las variables dependientes significantemente, disminuyendo lasrespuestas en el caso de altos niveles. La concentración de ácido acético presentó menor influencia en las repuestas.
La robustez de un método de ensayo puede ser descrita como el grado dereproducibilidad de los resultados obtenidos por análisis de la misma muestra bajo una variedad de condiciones normales de prueba, como diferentes laboratorios, analistas, equipo, etc.
La matriz del diseñocentral compuesto a analizar quedaría de la siguiente forma:
Experimentos
Acetonitrilo
(%)
ácido acético
(%, v/v)
acetonitrilo(%)
ácido acético
(%, v/v)
Resolución de la epicatequina
1-1
-1
5
0.5
5.34
2
-1
1
5
1.5
5.26
3
1
-1
7.5
0.5
4.4
4
1
1
7.5
1.5
3.92
5
0
0
6.25
1
9.35
6
0
0
6.25
1
9.38
7
0
0
6.25
1
9.58
8
-1.414
0
4.48
1
5.24
90
-1.414
6.25
0.293
5.25
10
1.414
0
8.2
1
4.03
11
0
1.414
6.25
1.071
4.61
Podemos ver que se trata de un diseño factorial 22 con 3 puntos centrales y 4 puntos axiales. Los...
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