Ensayo sobre el asilamiento de Clostridium Tetani
Páginas: 7 (1525 palabras)
Publicado: 30 de junio de 2013
Rápida, Sensitiva y Específica detección de Clostridium tetani por el Ensayo de LAMP (Loop-Mediated Isothermal Amplification / Amplificación Isotérmica Mediada por Bucle)
Jiang, Dongneng, Xiaoyun Pu*, Jiehong Wu, Meng Li, and Ping Liu
Departamento De Laboratorio Clínico, Hospital Xinqiao, Tercera Universidad Médica Militar, Chongqing 400037, China
Recibido: Mayo 31, 2012 / Revisado: Agosto27, 2012 / Aceptado: Agosto 28, 2012
El tétanos es una enfermedad infecciosa específica, que a menudo se asocia con eventos catastróficos como terremotos, traumas y heridas de guerra. El anaerobio obligado Clostridium tetani es el patógeno que causa el tétanos. Una vez que la infección del tétanos progresa a una etapa avanzada en las heridas de las extremidades, las tasas de amputación ymortalidad incrementan considerablemente. Por lo tanto, es necesario idear un método de detección de punto de atención rápida y sensible de C. tetani a fin de garantizar un diagnóstico precoz y el tratamiento clínico del tétanos. En este estudio, se desarrollo un método de detección de C. tetani el método lamp, en el que el gen de C. tetani la toxina del tétanos fue utilizado como el gen diana. Elmétodo era muy específico y sensible, con un límite de detección de 10 unidades formadoras de colonias (UFC) / ml, y se permitió el análisis cuantitativo. Mientras que la detección de C. tetani en muestras clínicas, se encontró que los resultados de LAMP coincidían con las pruebas tradicionales de identificación de bacterias anaeróbicas API 20A. En comparación con la prueba de API tradicional y ensayode PCR, la detección LAMP de C. tetani es sencillo y rápido, y los resultados pueden ser identificados mediante la observación a simple vista. Por lo tanto, es un método de prueba de punto de cuidado ideal y rápida para el tétanos.
El diagnóstico precoz de C. tetani puede prevenir eficazmente la incidencia del tétanos. Sin embargo, el uso de métodos de detección convencionales es limitado, dadala falta de laboratorios bien equipados en las zonas afectadas por los terremotos y otras calamidades. Por lo tanto, es necesario desarrollar un método de detección de punto de cuidado sencillo, rápido y específico para C. tetani, que ayudará en el tratamiento clínico del tétanos.
En la actualidad, los métodos de detección de C. tetani incluyen principalmente el examen microscópico de exudadosde la herida y el cultivo anaerobio seguido de la identificación bioquímica. El método de frotis directo es rápido y económico, sino que tiene una baja especificidad y las tasas de detección. Por lo tanto, es difícil de discriminar C. tetani de otras especies de Clostridium por este método. Cultivo anaeróbico [9] seguido de la identificación API es actualmente el "estándar de oro" en las técnicapara la detección de C. tetani. Sin embargo, el cultivo anaeróbico es una técnica que consume tiempo, que requiere instalaciones de laboratorio relativamente de alto estándar. Como resultado, esto conduce a un retraso, que está más allá de la ventana de tiempo óptimo para el tratamiento.
"LAMP", que es sinónimo de amplificación isotérmica mediada por bucle es un método simple, rápido,específico y rentable para la amplificación de ácido nucleico desarrollado exclusivamente por Eiken Chemical Co., Es un método de amplificación de genes recién desarrollado. Para llevar a cabo el ensayo de LAMP, se utilizan dos pares de cebadores, que están especialmente diseñados para el reconocimiento de seis regiones en el gen diana. A continuación, se inicia la línea de síntesis de ADN desplazamiento yauto-ciclado continuo con alta actividad de Bacillus stearothermophilus DNA polimerasa. En este proceso, se obtiene el producto de amplificación de tallo-bucle en las condiciones isotérmicas de 63-67oC. Una amplificación rápida y extensa del gen diana se puede lograr dentro de 30 - 60 min. La reacción se puede identificar con la ayuda de un turbidímetro, un dispositivo que detecta la presencia...
Jiang, Dongneng, Xiaoyun Pu*, Jiehong Wu, Meng Li, and Ping Liu
Departamento De Laboratorio Clínico, Hospital Xinqiao, Tercera Universidad Médica Militar, Chongqing 400037, China
Recibido: Mayo 31, 2012 / Revisado: Agosto27, 2012 / Aceptado: Agosto 28, 2012
El tétanos es una enfermedad infecciosa específica, que a menudo se asocia con eventos catastróficos como terremotos, traumas y heridas de guerra. El anaerobio obligado Clostridium tetani es el patógeno que causa el tétanos. Una vez que la infección del tétanos progresa a una etapa avanzada en las heridas de las extremidades, las tasas de amputación ymortalidad incrementan considerablemente. Por lo tanto, es necesario idear un método de detección de punto de atención rápida y sensible de C. tetani a fin de garantizar un diagnóstico precoz y el tratamiento clínico del tétanos. En este estudio, se desarrollo un método de detección de C. tetani el método lamp, en el que el gen de C. tetani la toxina del tétanos fue utilizado como el gen diana. Elmétodo era muy específico y sensible, con un límite de detección de 10 unidades formadoras de colonias (UFC) / ml, y se permitió el análisis cuantitativo. Mientras que la detección de C. tetani en muestras clínicas, se encontró que los resultados de LAMP coincidían con las pruebas tradicionales de identificación de bacterias anaeróbicas API 20A. En comparación con la prueba de API tradicional y ensayode PCR, la detección LAMP de C. tetani es sencillo y rápido, y los resultados pueden ser identificados mediante la observación a simple vista. Por lo tanto, es un método de prueba de punto de cuidado ideal y rápida para el tétanos.
El diagnóstico precoz de C. tetani puede prevenir eficazmente la incidencia del tétanos. Sin embargo, el uso de métodos de detección convencionales es limitado, dadala falta de laboratorios bien equipados en las zonas afectadas por los terremotos y otras calamidades. Por lo tanto, es necesario desarrollar un método de detección de punto de cuidado sencillo, rápido y específico para C. tetani, que ayudará en el tratamiento clínico del tétanos.
En la actualidad, los métodos de detección de C. tetani incluyen principalmente el examen microscópico de exudadosde la herida y el cultivo anaerobio seguido de la identificación bioquímica. El método de frotis directo es rápido y económico, sino que tiene una baja especificidad y las tasas de detección. Por lo tanto, es difícil de discriminar C. tetani de otras especies de Clostridium por este método. Cultivo anaeróbico [9] seguido de la identificación API es actualmente el "estándar de oro" en las técnicapara la detección de C. tetani. Sin embargo, el cultivo anaeróbico es una técnica que consume tiempo, que requiere instalaciones de laboratorio relativamente de alto estándar. Como resultado, esto conduce a un retraso, que está más allá de la ventana de tiempo óptimo para el tratamiento.
"LAMP", que es sinónimo de amplificación isotérmica mediada por bucle es un método simple, rápido,específico y rentable para la amplificación de ácido nucleico desarrollado exclusivamente por Eiken Chemical Co., Es un método de amplificación de genes recién desarrollado. Para llevar a cabo el ensayo de LAMP, se utilizan dos pares de cebadores, que están especialmente diseñados para el reconocimiento de seis regiones en el gen diana. A continuación, se inicia la línea de síntesis de ADN desplazamiento yauto-ciclado continuo con alta actividad de Bacillus stearothermophilus DNA polimerasa. En este proceso, se obtiene el producto de amplificación de tallo-bucle en las condiciones isotérmicas de 63-67oC. Una amplificación rápida y extensa del gen diana se puede lograr dentro de 30 - 60 min. La reacción se puede identificar con la ayuda de un turbidímetro, un dispositivo que detecta la presencia...
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