enzimatologia

Enzimología Clínica
(Tema 17)

Enzimología Clínica.T-17
Enzimologí Clí nica.T1. Los enzimas como catalizadores.
• Estructura y naturaleza de los enzimas
• Comportamiento cinético de los enzimas
2.- Medida de la actividad enzimática.
2.enzimá
• Fundamento.
• Factores que modifican la actividad enzimática.
• Medida de la actividad enzimática de muestras clínicas
• Instrumentación.Optimización de las condiciones de medida.
• Sistemas acoplados.
3.- Los enzimas como marcadores de lesión tisular.
3.lesió
• Enzimas como marcadores de daño celular
• Distribución tisular de los enzimas
• Patrón isoenzimático.
4.- Enzimas séricos de importancia diagnóstica clínica.
4.sé
diagnó
clí
• Transaminasas (ALT, AST)
• α−Amilasa
• Creatín fosfoquinasa (CPK)
• Fosfatasa ácida (ACP)• Fosfatasa alcalina (ALP)
• Gama glutamil transpeptidasa (GGT)
• Láctico deshidrogenasa (LDH)
• 5’-nucleotidasa (NTP)

1

1. Los enzimas como catalizadores.
• Naturaleza proteica de los enzimas

1. Los enzimas como catalizadores.
El que una reacción discurra más o
menos aprisa está en función no solo del
estado energético de los compuestos
antes y después sino también del propiomecanismo de la reacción.
Durante el curso de la reacción es
necesaria la formación de intermedios
reactivos cuyo nivel energético es
superior a la energía media de las
moléculas de los reactivos, lo que en la
práctica hace que la formación de esos
intermediarios suponga una barrera
energética que impide que la reacción
avance.
Cuanto mayor es el nivel energético
de los intermediosreactivos tanto
menor es la velocidad.

2

1.2 Velocidad de una reacción
reacció
La velocidad de una reacción (S → P) se define como:
v= -d[S]/dt = d[P]/dt
S→P
Δ [S]
ΔT

Δ [P]
ΔT

1.3 El Comportamiento cinético de las
ciné
reacciones catalizadas por enzimas

3

1.4 Velocidad de una reacción catalizada por un enzima.
reacció
La velocidad de una reacción catalizada por unenzima con cinética enzimática michaeliana
es proporcional a la concentración de substrato, pero es saturable y alcanza un máximo.
Reacción no
enzimática

“Actividad“ y “cantidad” de un enzima en una muestra.
Actividad“ cantidad”
• Actividad de un enzima: moles transformados por unidad de tiempo. Se
expresa en Unidades Internacionales (μmoles transformados/seg).
• Actividad específica de unenzima: actividad enzimática por masa de
enzima (μmoles/seg/mg proteína)
• Concentración: cantidad de enzima por unidad de volumen, o en su defecto
cantidad de actividad enzimática por unidad de volumen

En bioquímica clínica se recurre a expresar la cantidad de enzima de una muestra en
forma de Unidades de actividad enzimática por ml.
enzimá
ml.

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2.- La medida de la cantidad de unenzima en una muestra.
2.-

• Fundamento.
• Optimización de las condiciones de medida.
• Medida de la actividad enzimática de muestras clínicas
• Instrumentación.
• Sistemas acoplados

2.1 Medida de la “cantidad” de enzima presente en una muestra:
cantidad”

Medida de la cantidad de enzima (proteína) presente
en la muestra. Se utilizan métodos inmunológicos
Medida de la actividadcatalítica correspondiente al
enzima presente en la muestra. Se utilizan métodos
espectrofotométricos

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2.1 Medida de la actividad enzimática.
enzimá
S→P

La velocidad de una reacción se puede
expresar bien como moles de substrato
consumidos, o bien como moles de producto
formado por unidad de tiempo:
v= Δ [S]/ Δ T = Δ [P]/Δ T
La formación de producto o desaparición del
compuestode partida puede monitorizarse
espectrofotométricamente midiendo cambios
en la absorción óptica de la solución que
contiene los substratos y el enzima

Color

Δ [S]
ΔT

Δ [P]
ΔT

1 Unidad de actividad
enzimática se define
enzimá
como aquella cantidad de
enzima capaz de
transformar 1 μmol de
substrato por minuto.
minuto

Tiempo

2.2 Medida de la actividad enzimática......