Espectofotometria
Páginas: 6 (1366 palabras)
Publicado: 22 de abril de 2013
Analítica I
Investigación
Espectrofotometría Ultravioleta Visible
Ciclo Escolar: 2012 - 2013
Investigación
Espectrofotometría Ultravioleta Visible
Generalidades
La Espectrofotometría Ultravioleta Visible o Espectrofotometría UV-Vis es una técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en quelas moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz absorbida por la misma.
El fundamento de la espectroscopia se debe a lacapacidad de las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV-visible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valiosoinstrumento para la determinación y caracterización de biomoléculas.
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto permite poner en funcionamiento ciclos vitales como la fotosíntesis en plantas y bacterias. Cuando la luz (considerada como energía) es absorbida por una molécula se origina un salto desde un estado energético basal o fundamental,E1, a un estado de mayor energía (estado excitado), E2. Y solo se absorberá la energía que permita el salto al estado excitado. Cada molécula tiene una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue del resto de moléculas. Como consecuencia, la absorción que a distintas longitudes de onda presenta una molécula, esto es, su espectro de absorción, constituye una seña de identidad de lamisma. Por ultimo, la molécula en forma excitada libera la energía absorbida hasta el estado energético fundamental.
En espectroscopia el termino luz no solo se aplica a la forma visible de radiación electromagnética, sino también a las formas UE e IR, que son invisibles. En espectrofotometría de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV cercano, de 195-400nm) y elvisible (400-780nm).
Fig. 2 Espectro Electromagnético
La región UV se define como el rango de longitudes de onda de 194 a 400 nm. Es una región de energía muy alta. Provoca daño en el ojo humano así como quemaduras común. Los compuestos con dobles enlaces aislados, triples enlaces, enlaces peptídicos, sistemas aromáticos, grupos carbonilos y otros heteroatomos tienen su máximaabsorbancia en la región UV, por lo que esta es muy importante para la determinación cualitativa y cuantitativa de compuestos orgánicos. Diversos factores como pH, concentración de sal y el disolvente que alteran la carga de las moléculas, provocan desplazamientos de los espectros UV.
La fuente de radiación ultravioleta es una lámpara de deuterio.
En la región Visible apreciamos el color visiblede una solución y que corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe es el complementario del color que transmite.
Por tanto, para realizar mediciones de absorción es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la solución coloreada.
La fuente de radiación visible suele ser una lámpara de tungsteno y no proporciona suficienteenergía por debajo de 320 nm.
Transmitancia y Absorbancia
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io incide perpendicularmente sobre una disolucion de un compuesto quimico que absorbe luz o cromoforo, el compuesto absorbera una parte de la radiacion incidente (Ia) y dejara paras el resto (It), de forma que se cumple: Io = Ia + It
La Transmitancia...
Analítica I
Investigación
Espectrofotometría Ultravioleta Visible
Ciclo Escolar: 2012 - 2013
Investigación
Espectrofotometría Ultravioleta Visible
Generalidades
La Espectrofotometría Ultravioleta Visible o Espectrofotometría UV-Vis es una técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en quelas moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz absorbida por la misma.
El fundamento de la espectroscopia se debe a lacapacidad de las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV-visible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valiosoinstrumento para la determinación y caracterización de biomoléculas.
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto permite poner en funcionamiento ciclos vitales como la fotosíntesis en plantas y bacterias. Cuando la luz (considerada como energía) es absorbida por una molécula se origina un salto desde un estado energético basal o fundamental,E1, a un estado de mayor energía (estado excitado), E2. Y solo se absorberá la energía que permita el salto al estado excitado. Cada molécula tiene una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue del resto de moléculas. Como consecuencia, la absorción que a distintas longitudes de onda presenta una molécula, esto es, su espectro de absorción, constituye una seña de identidad de lamisma. Por ultimo, la molécula en forma excitada libera la energía absorbida hasta el estado energético fundamental.
En espectroscopia el termino luz no solo se aplica a la forma visible de radiación electromagnética, sino también a las formas UE e IR, que son invisibles. En espectrofotometría de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV cercano, de 195-400nm) y elvisible (400-780nm).
Fig. 2 Espectro Electromagnético
La región UV se define como el rango de longitudes de onda de 194 a 400 nm. Es una región de energía muy alta. Provoca daño en el ojo humano así como quemaduras común. Los compuestos con dobles enlaces aislados, triples enlaces, enlaces peptídicos, sistemas aromáticos, grupos carbonilos y otros heteroatomos tienen su máximaabsorbancia en la región UV, por lo que esta es muy importante para la determinación cualitativa y cuantitativa de compuestos orgánicos. Diversos factores como pH, concentración de sal y el disolvente que alteran la carga de las moléculas, provocan desplazamientos de los espectros UV.
La fuente de radiación ultravioleta es una lámpara de deuterio.
En la región Visible apreciamos el color visiblede una solución y que corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe es el complementario del color que transmite.
Por tanto, para realizar mediciones de absorción es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la solución coloreada.
La fuente de radiación visible suele ser una lámpara de tungsteno y no proporciona suficienteenergía por debajo de 320 nm.
Transmitancia y Absorbancia
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io incide perpendicularmente sobre una disolucion de un compuesto quimico que absorbe luz o cromoforo, el compuesto absorbera una parte de la radiacion incidente (Ia) y dejara paras el resto (It), de forma que se cumple: Io = Ia + It
La Transmitancia...
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