espectrofotometia

ESPECTROFOTOMETRÍA
La espectrofotometría es un método de análisis óptico utilizado en diversas investigaciones biológicas y químicas y se refiere a todos aquellos métodos cuantitativos y de análisis químicos que emplean la luz para determinar la concentración de sustancias químicas. Existen varios tipos de espectrofotometría según el tipo de radiación utilizada como la espectrofotometría deabsorción visible (colorimetría), ultravioleta e infrarroja.
Todas las sustancias pueden absorber energía radiante y esta absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende en gran medida de la estructura y característica química de cada sustancia química. Las sustancias adquieren un color debido a que solo llegan a absorber ciertas cantidades de onda de luz blanca y dejanpasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda que no es absorbida
1. FUNDAMENTOS DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA.
La espectrofotometría es uno de los métodos más empleados en análisis biológicos, bioquímicos, químicos y físicos, y está basado en la relación directa que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su concentración. Cuando la luz monocromática, es decir, con una solalongitud de onda, incide en un medio homogéneo, una parte de esta luz es absorbida por el medio y otra es transmitida, dependiendo del compuesto y del tipo de absorción a medir.
1.1 Leyes que rigen a la espectrofotometría.
Existen dos leyes principales que rigen el método de espectrofotometría: la Ley de Lambert y la Ley de Beer.
1.1.1 Ley de Lambert.
Cuando una luz pasa a través de un mediohomogéneo, la intensidad de la luz incidente disminuye proporcionalmente al espesor del medio, lo cual equivale a decir que la luz disminuye exponencialmente al aumentar el espesor del medio absorbente.
1.1.2 Ley de Beer.
Esta ley señala que al aumentar la concentración de la sustancia absorbente, la intensidad de la luz monocromática que pasa a través de ella disminuye de una forma equivalente.1.2 Conceptos de la espectrofotometría.
1.2.1 Absorbancia.
Es la cantidad de luz que absorbe cada sustancia ya así sea pura o en solución. Mientras mayor es la cantidad de luz absorbida mayor será la absorbancia y menor será la cantidad de luz transmitida (Transmitancia). La absorbancia, a una determinada longitud de onda lambda, es definida de la siguiente manera:

Donde I es la cantidad deluz transmitida e I es la cantidad de luz incidente.
1.2.2 Transmitancia.
La transmitancia es definida como la cantidad de luz que pasa a través de un cuerpo en una determinada longitud de onda. Cuando una luz pasa por un cuerpo, una parte de esta luz será absorbida por el mismo (Absorbancia), mientras que la parte de luz sobrante atravesará el cuerpo. La transmitancia se puede medir mediantela siguiente expresión:

Donde I es la cantidad de luz transmitida e I es la cantidad de luz incidente. También se puede expresar en porcentaje:

1.2.3 Longitud de onda.
Es una magnitud de onda que representa la distancia en la dirección de propagación entre dos puntos sucesivos de una onda periódica en la cual la fase es la misma.
1.2.4 Estándares o disoluciones patrón.
Son disolucionesque contienen concentraciones conocidas de la muestra que se analizará.
1.3 Curva de calibración.
Es uno de los métodos más utilizados para determinar la concentración en una muestra. Es una representación grafica de una señal que se mide en función de la concentración de una sustancia. Para realizar esta gráfica, es necesario comparar las propiedades de la muestra con las disoluciones estándar.Los estándares con los que se construirá la recta de calibración, se deben preparar de una manera independiente, a partir de una o varias soluciones madre.
1.3.1Como obtener la curva de calibración.
Para lograr obtener una curva de calibración de un compuesto en específico, se deben preparar diferentes concentraciones del mismo (estándares), determinándose para cada una de ellas el valor de...