Espectrofotometría
Páginas: 4 (928 palabras)
Publicado: 30 de junio de 2012
APARTADO II ESPECTRO DE ABSORCIÓN DE LAS FORMAS OXIDADA Y REDUCIDA DEL FMN. LEY DE LAMBERT-BEER: CÁLCULO DEL COEFICIENTE DE EXTINCIÓN MOLAR (J. Peinado, F. Toribio)
3(II). PROTOCOLO A REALIZAR3(II).1. Espectro de absorción de las formas oxidada y reducida del FMN El FMN en su forma oxidada presenta color amarillo. Cuando se reduce, la forma reducida, FMNH2, no presenta color. La reducción sehará empleando un potente reductor, el ditionito sódico, también llamado hidrosulfito (Na2S2O4). 1. Paso primero: Se necesitan 3 tubos, uno blanco y dos que contienen igual cantidad de FMN que, en unode ellos, se reduce por adición de ditionito sódico. (volumen en ml) Agua FMN 0,25 mM Ditionito Sódico 0,5 M Blanco 5,0 FMN 4,4 0,6 FMNH2 4,3 0,6 0,1
El ditionito debe ser preparado en el momento y,tras adicionarlo al tubo con FMN, se deben comenzar las lecturas en el colorímetro inmediatamente, debido a la tendencia a oxidarse del FMNH2 y que se observa por la aparición de nuevo del coloramarillo.
2. Paso segundo: Con el blanco se ajusta a cero el colorímetro. Tras sacar el tubo blanco, se lee la absorbancia de los otros dos tubos a distintas longitudes de onda, desde 380 a 500 nm.3(II).2. Ley de Lambert-Beer. Cálculo del coeficiente de extinción molar La absorbancia medida en el colorímetro varía linealmente cuando se emplean concentraciones diluidas del compuesto. 1. Pasoprimero: Se prepararán los siguientes tubos de ensayo, cuya composición y concentración se indican a continuación. El tubo 6 se suministrará ya preparado para que los alumnos determinen la concentración deFMN que contiene.
Blanco Agua (ml)
FMN 0,25 mM (ml)
Tubo 1 4,9 0,1
Tubo 2 Tubo 3 4,8 0,2 4,6 0,4
Tubo 4 4,4 0,6
Tubo 5 4,2 0,8
Tubo 6 X
5,0 0,0
2. Paso segundo: Se selecciona450 nm, ya que a esta longitud de onda está el máximo de absorción del FMN; se ajusta el cero de absorbancia con el
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blanco y se mide la absorbancia de los tubos, empezando por el de menor...
3(II). PROTOCOLO A REALIZAR3(II).1. Espectro de absorción de las formas oxidada y reducida del FMN El FMN en su forma oxidada presenta color amarillo. Cuando se reduce, la forma reducida, FMNH2, no presenta color. La reducción sehará empleando un potente reductor, el ditionito sódico, también llamado hidrosulfito (Na2S2O4). 1. Paso primero: Se necesitan 3 tubos, uno blanco y dos que contienen igual cantidad de FMN que, en unode ellos, se reduce por adición de ditionito sódico. (volumen en ml) Agua FMN 0,25 mM Ditionito Sódico 0,5 M Blanco 5,0 FMN 4,4 0,6 FMNH2 4,3 0,6 0,1
El ditionito debe ser preparado en el momento y,tras adicionarlo al tubo con FMN, se deben comenzar las lecturas en el colorímetro inmediatamente, debido a la tendencia a oxidarse del FMNH2 y que se observa por la aparición de nuevo del coloramarillo.
2. Paso segundo: Con el blanco se ajusta a cero el colorímetro. Tras sacar el tubo blanco, se lee la absorbancia de los otros dos tubos a distintas longitudes de onda, desde 380 a 500 nm.3(II).2. Ley de Lambert-Beer. Cálculo del coeficiente de extinción molar La absorbancia medida en el colorímetro varía linealmente cuando se emplean concentraciones diluidas del compuesto. 1. Pasoprimero: Se prepararán los siguientes tubos de ensayo, cuya composición y concentración se indican a continuación. El tubo 6 se suministrará ya preparado para que los alumnos determinen la concentración deFMN que contiene.
Blanco Agua (ml)
FMN 0,25 mM (ml)
Tubo 1 4,9 0,1
Tubo 2 Tubo 3 4,8 0,2 4,6 0,4
Tubo 4 4,4 0,6
Tubo 5 4,2 0,8
Tubo 6 X
5,0 0,0
2. Paso segundo: Se selecciona450 nm, ya que a esta longitud de onda está el máximo de absorción del FMN; se ajusta el cero de absorbancia con el
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blanco y se mide la absorbancia de los tubos, empezando por el de menor...
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