Espermicida De Papaina

Obtención del extracto
El fruto de C. papaya fue obtenido comercialmente en la ciudad de México. La semilla fue extraída, lavada con agua destilada y separada en dos grupos. El primero de ellos se puso a secar a temperatura ambiente y a la sombra durante 7 días. Al segundo grupo se le desprendió el mucílago y se puso a secar. Una vez secas, ambas semillas maduras fueron procesadas en la mismaforma: molidas en un mortero, se tomaron 40 g del pulverizado y fueron sometidos a extracción continua durante 5 horas en un equipo soxhlet con cloroformo (250 ml). Después de filtrar, el disolvente fue evaporado en un rotavapor. El residuo de las extracciones (40 g de la semilla) se secó en la sombra a temperatura ambiente por 2 días. Una vez seco, el material se colocó en un matraz con 300 ml deagua destilada y se sometió a temperatura de reflujo durante 4 horas a punto de ebullición. Trascurrido el tiempo, la muestra se filtró y el filtrado resultante fue sometido a un proceso de liofilización para obtener, finalmente, el extracto acuoso. El rendimiento del extracto acuoso de la semilla madura completa fue de 2.9 gmientras que el rendimiento del extracto acuoso de la semilla sin mucílagofue de 1.8 g.
Colecta del semen
Se obtuvo el eyaculado de cerdos adultos (> 18 meses de edad) por el método de la mano enguantada, posteriormente se filtró por medio de una gasa para obtener únicamente la fracción rica en espermatozoides; en el lapso de una hora se transportó al laboratorio en una caja de poliuretano a temperatura de 28 a 30º C para su estudio.
Evaluación del semen
En laevaluación básica se analizaron la movilidad progresiva y las anormalidades de la cabeza y cola, en un microscopio de campo claro a 400x. Se utilizaron únicamente eyaculados con movilidad progresiva mayor al 85% y anormalidades espermáticas menores al 15%.
Dilución del semen
De la suspensión de semen se tomó una alícuota para diluirla, en una solución de almacenamiento a 30ºC para obtener unaconcentración final de 50x106 espermatozoides en 1000 ml para su uso. La solución de almacenamiento (Reading) se preparó según Revell y Glossop (Revell y Glossop, 1989). Cada 100 ml contenía: Dglucosa (1.15 g), NaHCO3 (0.175 g), EDTA (0.234 g), citrato de sodio (1.164g) Tris (0.548g), ácido cítrico (0.41 g), cisteina (0.007g), trehalosa (0.1g), alcohol polivinílico (PVA) tipo II (0.01 g), KCL (0.075g), sulfato de estreptomicina (0.05 g), ajustado a una osmolaridad de 284 mosm/kg y un pH de 6.4.

Concentración del extracto
Se emplearon los extractos acuosos de la semilla madura con y sin mucílago de C. papaya. Se preparó una solución al 10 % con 0.15 g del extracto acuoso disuelto en 1500 ml de medio TALP-HEPES (T-H) suplementado con BSA (0.03 g/5 ml) y piruvato de sodio 1 mM (200 ml/5ml)(Sigma Chemicalls St. Louis, MO EUA) a un pH de 7.3.Preparación de la muestra de espermatozoides Lavado de espermatozoides. Se tomaron 3000 ml de la muestra diluida de espermatozoides y se centrifugaron a 1500 rpm durante 5 minutos, se decantó el sobrenadante y el sedimento fue resuspendido en 1000 ml de medio T-H suplementado, se centrifugó nuevamente a 1500 rpm /5 minutos. El sobrenadante fuedecantado y el sedimento fue resuspendido en 3000 ml de medio T-H suplementado, para ser utilizados posteriormente.
Tratamiento
Por cada extracto se prepararon cajas de cuatro pozos con las concentraciones finales de 1, 2,3, 4 y 5 % disueltas en medio T-H suplementado, dichas cajas y la muestra de espermatozoides se incubaron por separado a 37 oC en una atmósfera al 5% de CO2 y humedad asaturación durante 10 minutos. Transcurrido este tiempo, se agregaron a cada pozo 250 ml de los espermatozoides diluidos, para obtener una concentración de 12 x106 espermatozoides por pozo, siendo el volumen final de cada pozo de 750 ml. Una vez agregados los espermatozoides se evaluó la movilidad y viabilidad espermática de cada tratamiento. Posteriormente, los tratamientos fueron incubados durante 1,...