Estudio de la accion citotoxica del tratamiento combinado de Saccharomyces cerevisae con ultrasonido y endoperoxidos
Páginas: 10 (2408 palabras)
Publicado: 6 de junio de 2014
Estudio de la acción citotóxica del tratamiento combinado de Saccharomyces cerevisiae con
ultrasonido y endoperóxidos.
Resultados y Discusión
_____________________________________________________________________________
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
5.1. Fotosíntesis del sonosensibilizador DFAO2 a partir de DFA.
La eficiencia de la reacción para generar la molécula sonosensibilizadora DFAO2fue muy
buena ya que el rendimiento en la producción de endoperóxidos fue del orden del 98%. La lectura
al espectro visible reveló que partiendo de una concentración inicial de DFA = 4,40 x 10-3 M, se
obtuvo una concentración final de DFA = 6,85 x 10-5, por lo que la concentración de
endoperóxidos (DFAO2) fue de 4,30 x 10-3. Este rendimiento óptimo ha sido reportado por otros
investigadorescuando han generado DFAO2 a partir de hidrocarburos aromáticos, (Khan et al.,
1986; Wasserman and Larsen, 1972).
5.2. Sonolisis de la molécula DFAO2 mediante ondas ultrasónicas
La cuantificación de los productos de reacción generados mediante sonolisis de la molécula
DFAO2 reveló una producción exitosa de O singlete del orden del 80%, con el mismo nivel de
eficiencia reportado por Duco ycol., (2008).
5.3. Mantenimiento de la cepa fúngica
Con el procedimiento descripto en el apartado 4.2. de métodos logró mantenerse la cepa
fúngica problema en óptimas condiciones de viabilidad.
5.3.a. Determinación del título de levaduras por UFC/mL
La determinación del título fúngico en la mayoría de las experiencias indicó valores del
orden 3 x 107 UFC/mL. El análisis macroscópico de lascolonias desarrolladas en el agar se condijo
con las características morfológicas ya descriptas para la levadura empleada, Figura 7.
Aldo José Dichiara
29
Estudio de la acción citotóxica del tratamiento combinado de Saccharomyces cerevisiae con
ultrasonido y endoperóxidos.
Resultados y Discusión
_____________________________________________________________________________Figura 7: Aspectos macroscópicos del desarrollo de colonias fúngicas
típicas de Saccharomyces cerevisiae
5.3.b. Preparación del inóculo fúngico
Durante la preparación del inóculo fúngico los ensayos revelaron un desarrollo óptimo de la
levadura que indicó un buen estado fisiológico del microorganismo garantizando la continuidad
de las experiencias. El criterio de selección de un valor de D.O de0,05, leído al espectrofotómetro
con una longitud de onda de 600 nm, estuvo basado en el análisis de datos bibliográficos (NCCLS
2002; Yin et al 2006).
5.4. Determinación de la sensibilidad de la cepa fúngica en función de:
5.4.a. La energía de US aplicada
Los valores de viabilidad celular alcanzados luego de la aplicación de diferentes niveles de
energía de US se muestran en la tablasiguiente.
Aldo José Dichiara
30
Estudio de la acción citotóxica del tratamiento combinado de Saccharomyces cerevisiae con
ultrasonido y endoperóxidos.
Resultados y Discusión
_____________________________________________________________________________
Tabla 6: Sensibilidad de Saccharomyces cerevisiae a la acción de diferentes niveles de energía ultrasónica.
TRATAMIENTOS
Energíaaplicada (Ws)
PARÁMETROS
EVALUADOS
T0
T1
T2
T3
T4
T5
T6
0
1000
4000
7000
10000
13000
16000
UFC/mL
3,18 x 10
2,69 x 10
2,61 x 10
2,05 x 10
2,25 x 10
1,36 x 10
1,18 x 10
% Viabilidad
Promedio
100
84,7
82,18
64,44
70,84
42,93
37,15
7
7
7
7
7
7
7
En este estudio pudo demostrarse que amedida que se incrementó la energía disipada en
la solución, disminuyó la viabilidad celular porcentual calculada según la reducción del número de
UFC/mL en los diferentes tratamientos respecto del sistema control sin tratar. Los datos, que
fueron analizados por análisis de regresión lineal, permitieron construir el Grafico 1 cuyo análisis
confirma cierta relación dosis-respuesta.
Gráfico 1:...
ultrasonido y endoperóxidos.
Resultados y Discusión
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5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
5.1. Fotosíntesis del sonosensibilizador DFAO2 a partir de DFA.
La eficiencia de la reacción para generar la molécula sonosensibilizadora DFAO2fue muy
buena ya que el rendimiento en la producción de endoperóxidos fue del orden del 98%. La lectura
al espectro visible reveló que partiendo de una concentración inicial de DFA = 4,40 x 10-3 M, se
obtuvo una concentración final de DFA = 6,85 x 10-5, por lo que la concentración de
endoperóxidos (DFAO2) fue de 4,30 x 10-3. Este rendimiento óptimo ha sido reportado por otros
investigadorescuando han generado DFAO2 a partir de hidrocarburos aromáticos, (Khan et al.,
1986; Wasserman and Larsen, 1972).
5.2. Sonolisis de la molécula DFAO2 mediante ondas ultrasónicas
La cuantificación de los productos de reacción generados mediante sonolisis de la molécula
DFAO2 reveló una producción exitosa de O singlete del orden del 80%, con el mismo nivel de
eficiencia reportado por Duco ycol., (2008).
5.3. Mantenimiento de la cepa fúngica
Con el procedimiento descripto en el apartado 4.2. de métodos logró mantenerse la cepa
fúngica problema en óptimas condiciones de viabilidad.
5.3.a. Determinación del título de levaduras por UFC/mL
La determinación del título fúngico en la mayoría de las experiencias indicó valores del
orden 3 x 107 UFC/mL. El análisis macroscópico de lascolonias desarrolladas en el agar se condijo
con las características morfológicas ya descriptas para la levadura empleada, Figura 7.
Aldo José Dichiara
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Estudio de la acción citotóxica del tratamiento combinado de Saccharomyces cerevisiae con
ultrasonido y endoperóxidos.
Resultados y Discusión
_____________________________________________________________________________Figura 7: Aspectos macroscópicos del desarrollo de colonias fúngicas
típicas de Saccharomyces cerevisiae
5.3.b. Preparación del inóculo fúngico
Durante la preparación del inóculo fúngico los ensayos revelaron un desarrollo óptimo de la
levadura que indicó un buen estado fisiológico del microorganismo garantizando la continuidad
de las experiencias. El criterio de selección de un valor de D.O de0,05, leído al espectrofotómetro
con una longitud de onda de 600 nm, estuvo basado en el análisis de datos bibliográficos (NCCLS
2002; Yin et al 2006).
5.4. Determinación de la sensibilidad de la cepa fúngica en función de:
5.4.a. La energía de US aplicada
Los valores de viabilidad celular alcanzados luego de la aplicación de diferentes niveles de
energía de US se muestran en la tablasiguiente.
Aldo José Dichiara
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Estudio de la acción citotóxica del tratamiento combinado de Saccharomyces cerevisiae con
ultrasonido y endoperóxidos.
Resultados y Discusión
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Tabla 6: Sensibilidad de Saccharomyces cerevisiae a la acción de diferentes niveles de energía ultrasónica.
TRATAMIENTOS
Energíaaplicada (Ws)
PARÁMETROS
EVALUADOS
T0
T1
T2
T3
T4
T5
T6
0
1000
4000
7000
10000
13000
16000
UFC/mL
3,18 x 10
2,69 x 10
2,61 x 10
2,05 x 10
2,25 x 10
1,36 x 10
1,18 x 10
% Viabilidad
Promedio
100
84,7
82,18
64,44
70,84
42,93
37,15
7
7
7
7
7
7
7
En este estudio pudo demostrarse que amedida que se incrementó la energía disipada en
la solución, disminuyó la viabilidad celular porcentual calculada según la reducción del número de
UFC/mL en los diferentes tratamientos respecto del sistema control sin tratar. Los datos, que
fueron analizados por análisis de regresión lineal, permitieron construir el Grafico 1 cuyo análisis
confirma cierta relación dosis-respuesta.
Gráfico 1:...
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