extraccion de adn y purificacion

PURIFICACIÓN DE ADN A PARTIR DE MUESTRAS DE
SANGRE Y ELECTROFORESIS DEL ADN EN GELES DE AGAROSA

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RESUMEN
Existen diferentes métodos y tecnologías para el aislamiento de ADN genómico. En general, estos métodos implican la destrucción y la lisis del material celular , seguido por precipitación de proteínas típicamente obtenido por digestión con proteinasa K y extracción de ADN utilizandoaltas concentraciones de sales, extracción orgánica o unión de ADN a una fase sólida ( técnica de intercambio iónico o sílice ) .Por lo general , el material genético es recuperado por precipitación con etanol o isopropanol . La elección de cada método depende de muchos factores tales como : cantidad requerida de ADN , la pureza y la aplicación .
Mientras tanto la electroforesis es la separación demoléculas ( proteínas , isoenzimas , ácidos nucleicos ) a través de una matriz en solución tampón ( agarosa , acrilamida , almidón ) . La matriz actúa como un filtro , que separa las moléculas en un campo eléctrico de acuerdo con el tamaño de la carga y la red que poseen. En el caso de los ácidos nucleicos , el grupo fosfato es responsable de la fuerte carga negativa en condiciones de pH neutro ,causando fragmentos migran hacia el polo positivo (ánodo ) durante la electroforesis ( Posso y Ghunaym 2008 ) .
ABSTRACT
Different methods and technologies exist for the isolation of genomic DNA. In general these methods involve the destruction and lysis of the cellular material, followed by protein precipitation typically obtained by proteinase K digestion and DNA extraction using highconcentrations of salts, organic extraction or binding of DNA to a solid phase (ion exchange technique or silica).
Usually, the genetic material is recovered by precipitation using ethanol or isopropanol. The choice of each method depends on many factors such as: DNA required amount, purity and application.
meanwhile the Electrophoresis is the separation of molecules (proteins, isoenzymes, nucleicacids) through a buffered matrix (agarose, acrylamide, starch). The matrix acts as a filter, separating the molecules in an electric field according to the size and net charge they possess. In the case of nucleic acids, the phosphate group is responsible for the strong negative charge at neutral pH conditions, causing fragments migrate towards the positive pole (anode) during electrophoresis (Possoand Ghneim 2008).
Palabras claves: ADN, Electroforesis, Lisis y Proteinasa K.

INTRODUCCION
Existen métodos y tecnologías diferentes para el aislamiento de ADN genómico. En general todos estos métodos involucran la destrucción y lisis del material celular, seguido de una precipitación de proteínas típicamente obtenida por digestión con proteinasa K, y la extracción del ADN usando altasconcentraciones de sales, extracción orgánica o la unión del ADN a una fase sólida (intercambio iónico o técnica de sílica).
Usualmente el material genético es recuperado por precipitación usando etanol o isopropanol. La elección de cada método dependerá de muchos factores como: la cantidad requerida de ADN, la pureza y aplicación del mismo.
La separación del ADN desde los componentes celulares estádividida dentro de 4etapas: destrucción; lisis; remoción de proteínas y contaminantes; recuperación del ADN. En algunos métodos las fases 1 y 2 se encuentran combinados.
-Preparación de Lisados crudos
Un técnica fácil para obtener ADN genómico es incubar las células usadas a altas temperaturas (por ejemplo a 90° C durante 20 minutos) o hacer digestión con proteinasa K. Teniendo en cuenta que estosmétodos solo son apropiados para un rango limitado de aplicaciones.
-Método salting out o altas concentraciones de sales
Es una técnica convencional donde las proteínas y otros contaminantes son precipitados de las células usadas usando altas concentraciones de sales tales como acetato de potasio o de amonio. Los precipitados son removidos luego por centrifugación, y el ADN es recuperado por...