extraccion de adn y vegetal

Extracción de ADN animal y vegetal


Resumen
Existen varios estudios y trabajos ADN. Con el paso del tiempo de han desarrollado varias técnicas diferentes para la extracción de este. En este trabajo se extrajo muestras de ADN de origen animal (pollo, camarón) y vegetal (Lantana) con el objetivo de separar el ADN del resto de los componentes celulares. Para la extracción se utilizó el kit de“QIAamp DNA mini kit”. Ambas muestras fueron extraídas sin problema alguno. Siendo asi, la extracción de ADN es indispensable. Sin emb argo se necesita usar diferentes métodos de extracción dependiendo del tejido se vaya a utilizar.

Palabras clave: Extracción de ADN, extracción manual, extracción con kit, tejido animal, tejido vegetal.

Introducción
El análisis de la molécula de ADNconstituye una herramienta muy valiosa que ha permitido delinear estrategias aplicadas a la investigación básica y al diagnóstico de entidades de origen genético. El ADN puede ser extraído de innumerables tipos de material biológico, y el éxito del análisis molecular depende de su adecuado aislamiento en términos de cantidad, calidad y pureza (Mendoza, 2010). El objetivo del presente trabajo es extraerADN de diferentes tipos de organismo, para eso es necesario separar el ADN del resto de los componentes celulares así como del material no biológico que pueda estar presente.
Los protocolos de extracción buscan, en general, eliminar potentes inhibidores de reacciones de amplificación que eviten o dificulten análisis posteriores. El proceso general de aislamiento involucra tres pasos: primero, lalisis de membranas celulares, mediante el uso de buffer específico y altas temperaturas; segundo, la degradación de las proteínas por incubación y proteinasa K; tercero, la extracción de ADN y su precipitación mediante el uso de alcoholes (Mendoza, 2010).
Materiales y métodos
Las muestras para la extracción de ADN animal fueron de tejido de pollo y camarón, y en el caso de extracción de ADNvegetal se utilizó la especie Lantana sp. Para ambas extracciones se utilizaron los reactivos del kit para extracción de ADN “QIAamp DNA mini kit”.
Se pesaron 25mg, de tejido y se homogenizó con un pistilo estéril y 80µl de PBS; posteriormente se añadieron 100µl de buffer ATL y se agitó con el vórtex. Se añadieron 30µl de proteinasa K y se mezcló con el vórtex e incubó toda la noche a 56o C. Seagregaron 200µl de bufferAL y se mezclaron por 15 segundos con el vórtex para después incubarse por 10 minutos a 70oC. Se añadieron 200µl de etanol absoluto y se mezcló con el vórtex. Se vertió toda la mezcla en la columna y se centrifugo a 6000 x g (8000 rpm) por minuto a 4oC. Se descartó lo que paso por la columna al tubo colector. Se añadieron 500µl de buffer AW1 para centrifugar a 6000 x g porminuto a 4oC y se vuelve a descartar lo que paso por la columna al tubo colector y se vuelve a centrifugar. Se colocó la columna en un microtubo de 1.5ml añadiéndole 200µl de buffer AE e incubándolo por 5 minutos a temperatura ambiente, centrifugando a 6000 x g por un minuto a 4oC, se repite este paso añadiendo 100µl de buffer AE.
Para la extracción de ADN se realizó un procedimiento manual. Semolieron 20mg de tejido fresco previamente congelado con nitrógeno líquido. Se agregaron 600µl de buffer lisis (Tris-HCL 100mMa pH 8.0, NaCl 20mM, EDTA 20mM, y N- Lauril sarcosina al 1%) a un tubo falcon de 50mL, así como el polvo molido. Se vertieron hasta humedecer el polvo y se dejó reposar a temperatura ambiente para agilizar el proceso. Se añadieron 100µl de fenol (equilibrado con tris) y sehomogenizó con el vórtex. En una balanza se equilibraron los tubos con fenol, centrifugando por 20 minutos a 4oC A 12,000 RPM. Seretoma la fase acuosa transfiriéndola a otro tubo agregándole 5µl de RNAsa (10mg/mL). Se mezcló por inversión y se incubó a 37oC por 15 minutos. Se precipito sobre isopropoanol frío 600 µl ysobre estese vació el sobrenadante que viene de la incubación. Se mezclaron...