EXTRACCION DE ADN

Extracción de ADN

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MATERIAL Y REACTIVOS
• Muestra vegetal
• Agua (destilada o mineral)
• Sal de mesa
• Bicarbonato sódico
• Detergente líquido ochampú
• Alcohol isoamílico a 0ºC • Batidora
• Nevera
• Colador o centrífuga
• Vaso de pp
• 4 Tubo de ensayo
• Varilla fina
• 2 pipetas de 5 ml
• 2 pipetas de 10 ml

FUNDAMENTOLa extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula.Se empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN.
En ese momento, el tampón contiene ADN ytodo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción.
Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas máspequeñas y separado de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamílico, probablemente el únicoreactivo de esta práctica.
REALIZACIÓN
1. Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado:
o 120 ml de agua, si es posible destilada ysi no mineral. No usar agua del grifo.
o 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.
o 5 g de bicarbonato sódico.
o 5 ml de detergente líquido o champú.
2. Elegir la muestra que va aproporcionar el ADN entre los vegetales (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.
3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos.Así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.
4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar vigorosamente...