extraccion de adn

 ASIGNATURA CIENCIAS BASICAS BIOMEDICAS

PRÁCTICA DE Laboratorio
extraccion de adn a partir de muestras de sangre
DOCENTE. angela jimenez leaño

OBJETIVOS:

1. Instruir al estudiante en elconocimiento y manejo de las herramientas empleadas frecuentemente en los laboratorios de biología molecular.

2. Capacitar al estudiante en el fundamento de las técnicas de extracción de ADN3. Dar a conocer al estudiante el para qué?, a partir de qué? y Como? se obtiene ADN cromosomal.

4. Afianzar los conocimientos teóricos en relación a la estructura e importancia del ADN entodos los organismos vivos.

MATERIALES:

Kit de extracción DNA 2000® de CorpoGen S.A.
Viales de 2ml
Isopropanol
Micropipetas
Microcentrifuga
Vortex

Nota: Los estudiantes únicamentedeberán llevar guantes, tapa bocas, gorro , servilletas y la guía.

METODOLOGIA

1. Recolectar de 2 a 5ml de sangre sobre anticoagulante EDTA. No es recomendable el uso de heparina, cuando el DNA se vaa emplear para PCR, actúa como inhibidor de la misma.

La sangre a utilizar debe ser fresca, sin embargo también puede utilizarse sangre que haya sido almacenada en refrigeración o congelación,aunque la cantidad de ADN obtenido puede ser menor.

2. Tomar 400l de sangre (que incluya glóbulos rojos), y transferirlo a un micro tubo o vial de 1.5ml.

3. Lavar las muestras hasta cuatro(4),veces (o más si es necesario) con 1000l de solución de lavado N° 1, para eliminar por lisis celular la mayoría de los glóbulos rojos, agitar con Vortex durante 20segundos entre lavado y lavado, luegocentrifugar a 14000 rpm x 5 minutos cada lavado, a – 4 ºC y eliminar el sobrenadante por inversión.

4. Cerciorarse de que después del último lavado las células queden muy bien resuspendidas en elvolumen remanente de unos 20l, esto facilita en gran medida la lisis celular.

5. Adicionar 500l de la solución N° 2, Adicionar por 5 minutos.

6. Adicionar 500l de la solución salina N° 3,...