Extracción Y Aislamiento Del Adn De Células Vegetales Y Animales.

Extracción y aislamiento del ADN de células vegetales y animales.



El Ácido Desoxirribonucleico (ADN), es el material genético de todos los sistemas vivos y de casi todos los virus. Es el ADN quien lleva la información necesaria para dirigir la síntesis de proteínas y la duplicación de la misma molécula. Esta biomolécula fue detectada en el núcleo celular por el investigador F. Miesher en1869 y desde los años cuarenta O. Avery y sus colaborados descubrieron que el material genético está formado de ADN.
En las últimas décadas, la Biología se ha enriquecido con una variedad de técnicas que han permitido la posibilidad de entender con mayor precisión, estructuras, funciones, mecanismos o fenómenos de los sistemas vivos.
La manipulación del ADN, es uno de los ejemplos másespectaculares del avance de la aplicación de una serie de herramientas en Biología, que anteriormente no se contemplaban en el campo científico, y en la actualidad se usan de manera rutinaria para desarrollar una amplia variedad de estudios genéticos.
Para estudiar el ADN es imprescindible aislarlo e identificarlo. Existen diferentes métodos de aislamiento, dependiendo del tipo de estudio oinvestigación que se quiera realizar. Sin embargo, todos los métodos comparten el hecho de que es una molécula situada al interior de estructuras membranosas y está asociada con proteínas, entonces se requiere usar sustancias adecuadas para obtener al ADN de la forma más purificada posible.
La técnica utilizada en esta actividad experimental, se basa por un lado, en el principio de que el componentefundamental de las membranas plasmática y nuclear, son los lípidos, en consecuencia, se utiliza un detergente (surfactante) para romper estas estructuras y permitir la salida del ADN. Por otro lado, el ADN de vegetales y animales se encuentra asociado a proteínas de tipo histona, por lo tanto, al agregarle alcohol, se precipitan las proteínas y de esta forma se obtiene el ADN como una estructura máspura. Finalmente, como el ADN es una molécula de carácter ácido, es posible identificarlo con colorantes específicos como el anaranjado de acridina.

OBJETIVOS
* Efectuar la técnica de extracción y aislamiento de ADN en chícharos y en hígado de pollo para visualizar el aspecto real y diferenciarlo del Modelo del ADN propuesto por Waston y Crick.
* Profundizar la comprensión de conceptosrelacionados con los aspectos generales e importancia de la replicación del ADN.
* Promover el desarrollo de habilidades, actitudes y destrezas al llevar a cabo la actividad experimental

MATERIAL Y EQUIPO * 2 probetas graduadas de 50 ml. * 1 varilla de vidrio. * 1 portaobjetos. * 1 cubreobjetos. * 1 vaso de precipitados de 50 ml. * 1 caja de Petri. * 1 gotero. |* 1 mortero. * 1 bisturí. * 1 aguja de disección. * 1 balanza granataria. * 1 microscopio de contraste de fases. * 1 coladera fina o gasas (10 x 10 cm.). |
Material Biológico
* 10 g de chícharos.
* 2 g de hígado de pollo o de ternera.

SUSTANCIAS
* 10 ml. de agua desionizada o destilada.
* 20 ml. de desoxicolato de sodio (1 g. de desoxicolato en 60 ml. deagua destilada o desionizada). 20 ml. de etanol absoluto o al 95% FRIO (el alcohol debe estar a 4 oC por lo menos 1 hora antes de iniciar la actividad y permanecer en hielo durante todo el experimento).
* Colorante Anaranjado de Acridina.

PROCEDIMIENTO

Resultados y explicación
El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentosde ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.
Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando las grasas (lípidos) y las...