fertilización invitro

Producción in vitro de embriones
Aspiración
Los oocitos son obtenidos de ovarios de animales adultos de rastros
Transporte de los ovarios al rastro de 2 a 3 horas en 0.15 M NaCl (Cloruro de Sodio0.15 M o 0.9%) a temperatura ambiente, enjuagar de 2 a 3 veces para retirar la sangre y cortar exceso de tejido.
Temperatura a la aspiración: 22 a 25°C (ideal)
Aspiración por medio de un sistema devacío a una presión no mayor a 20 mm de Hg (2 a 5 mm Hg) para evitar desnudar los COC’s.
Aguja calibre 18 de 1’’.
Utilizar guantes; enjuagarlos con alcohol para retirar polvo y quitar con soluciónsalina.
Aspirar: usar material esterilizado y seco
Folículos antrales de 2 a 8 mm, llegando al folículo por un lado, evitando reventarlo y darla algunas pasadas, apretar el ovario para facilitar eltrabajo, tirar ovarios que se ensucien y dar vuelta completa al ovario, secar.
Contar el total de cuerpos lúteos y de ovarios para registros
Usar tubos de 50 ml, previamente tibiados a 37°C ymantenerlos calientes.
Preparar el material a usar y limpiar con alcohol antes de empezar a trabajar (70%)
Dejar las áreas limpias y recogidos.
Selección y maduración:
Prepara el medio: tibiar a 37°C:medio: H-CDM-M medio químicamente definido para manejo de oocitos.
Por medio de una pipeta se obtiene el pellet del fondo del tubo (3 ml) y se coloca en un plato Petri de 65 X 15 mm y se diluye conuna cantidad igual o mayor de medio H-CDM-M. usar alcohol equipo y manos.
Por medio de un estereoscopio se seleccionan COC’s con mas de 3 capas de células cumulares no expandidas y morfológicamentebright y citoplasma granulado uniformemente. Selección parra maduración
Poner el medio a equilibrar –IVM- (medio para maduración de oocitos). Mínimo dos horas en atmosfera 5% de CO2 y 38.5°C. agregarhormonas
Enjuagar los oocitos dos veces en medio H-CDM-M (plato Petri 35 X 15 mm)
Formar grupos homogéneos de 50 oocitos
Limpiar los grupos de restos de células cumulares
Pasar los grupos a un...