Fingerprint

Introducción

El DNA figerprinting o huella genética es una técnica que se utiliza para analizar la evidencia de casos policiales u otros donde la identidad del criminal o la de un individuo necesitan ser comprobadas, dependiendo de la cantidad de muestra es el tipo de técnica que se utiliza , si hay poca muestra se ocupa PCR para amplificar dicha muestra, si hay una cantidad de muestra quecontienen grandes cantidades de DNA , se utilizan técnicas basadas en la observación de los sitios de corte de enzimas de restricción como RFLP, estas enzimas de restricción actúan como tijeras moleculares que reconocen y cortan secuencias específicas de DNA (actúan de forma óptima a 37ºC), si se tiene un DNA lineal se obtienen 2 fragmentos, en cambio si se tiene un DNA plasmidial ( como el que seutilizará en el práctico) se obtienen varios fragmentos de distintos tamaños, estos fragmentos pasan a electroforesis “movimiento por electricidad” en geles de agarosa, esto permite mediante la electricidad separar los fragmentos de DNA según su tamaño , como los fragmentos están cargados negativamente migran hacia el polo positivo, por lo que los fragmentos de menor tamaños migran a mas distanciaque los de mayor tamaño, para visualizar las bandas es necesario teñirlas con bromuro de Etidio.

En el práctico, a partir de muestras de DNA de sospechosos y de la escena del crimen, utilizando la técnica del fingerprinting, se determinará que sospechoso según su DNA es el culpable de cometer el crimen.

Objetivos:
-Preparar cada tubo eppendorff (6 tubos) con la enzima de restriccióncorrespondiente, la muestra de DNA y amortiguador.
- Comparar el patrón de bandas producido por la digestión con enzimas de restricción de una muestra de DNA obtenida a partir de la escena del crimen con las muestras de DNA de cinco sospechosos.
- Comprender la utilidad del DNA en la identificación de individuos.

Metodología
-Tomar la enzima y depositarla en el contenedor con hielo, luego marcarlos 6 tubos eppendorff con las siglas CS, S1, S2, S3, S4, S5, respectivamente, además de las iniciales de su grupo.
-Con una micropipeta agregar 10 μL de cada muestra de DNA en los respectivos tubos, cambiando la punta de la micropipeta cada vez que haga esta operación. Luego agregue 10 μL de la mezcla de enzima de restricción en cada tubo, asegurándose de cambiar la punta de la micropipeta.-Cerrar los tubos y mezclar el contenido agitando con los dedos.
-Depositar en una gradilla y colocarlos en un baño a 37ºC durante 45 minutos
-Después de incubar los tubos, tomarlos y centrifugarlos a 10000 rpm durante un minuto
-Agregar 5 μL de amortiguador o buffer de carga dye (contiene glicerol, Tris pH8 y dos colorantes azul de bromofenol y Xylen cianol) a cada tubo.
-Agregar amortiguadorTAEx1 a la cámara de electroforesis que contiene el gel de agarosa y cargue 10 μL de estándar de peso molecular y 20 μL de cada muestra en los bolsillos del gel de agarosa.
-Someter a la cámara a una diferencia de potencial de 100V durante 30 minutos.
-Luego de la electroforesis tomar el gel y teñirlo con bromuro de Etidio 10mg/ml (esperar 10 minutos a Tº ambiente), pero en nuestro laboratorio nose uso bromuro de etidio por lo altamente cancerígeno.
-Con cuidado lavar con agua destilada el gel, para sacar los excesos de tinción.
-Observar el criminal de acuerdo el patrón de bandas de las muestras de DNA en la escena del crimen y compararlo con cada sospechoso.
Resultados:

[pic]

A simple vista el sospechosos 3 tiene un gran parecido con la de la escenadel crimen, los sospechosos 4 y 5 tienen un gran parecido entre sí pero al comparar las bandas con la escena del crimen no tienen ningún parecido, por lo que se descartan como culpables.
Así mismo nos dimos cuenta que el criminal era el sospechoso 3, ya que presenta la misma cantidad y posición de las bandas que la muestra obtenida en la escena del crimen.

Discusiones

• ¿Por qué...