FLUORIMETRÍA

FLUORIMETRÍA

FLUORIMETRÍA
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Técnica de laboratorio utilizada para calcular:
 La intensidad
 El tipo de radiación fluorescente
Que emite una determinada sustancia cuando está
expuesta a una radiación incidente de una
determinada longitud de onda.
Se puede realizar un análisis:
 Cualitativo (identificar)
 Cuantitativo (determinar la concentración).

CONCEPTOS GENERALESDE FLUORIMETRÍA

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Inicialmente la fluorimetría se utilizó con
sustancias que poseían fluorescencia natural.
Se puede usar con sustancias que no tienen
fluorescencia natural, pero que previamente se
hacen reaccionar con productos fluorescentes,
adquiriendo así fluorescencia.
Un átomo puede excitarse al absorber energía
procedente de una fuente externa (radiación
ultravioleta),la excitación provoca que los
electrones pasen a órbitas más alejadas del
núcleo. En este caso se dice que el átomo ha
pasado a una situación metaestable.

CONCEPTOS GENERALES DE
FLUORIMETRÍA


El estado metaestable de un átomo es una situación
de desequilibrio, que tiende a desvanecerse en muy
poco tiempo.

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Cuando la radiación excitadora deja de actuar, los
electrones pasan aocupar un nivel inferior más
estable.

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En la transición de un nivel superior a otro inferior, el
átomo pierde energía potencial en forma de radiación,
que se emite en forma de radiación luminosa dentro
del espectro visible.

CONCEPTOS GENERALES
DE FLUORIMETRÍA


Al excitarse una cantidad elevada de átomos y de
electrones, la emisión fluorescente en sólidos y líquidos
sueleser una banda que corresponde a un intervalo de
longitudes de onda (distribución espectral).

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La banda fluorescente emitida es constante en
condiciones de trabajo estándar y, por ello
caracteriza a una determinada sustancia, por lo que se
puede utilizar para su análisis cualitativo.

ESPECTRO DE
EXCITACIÓN


Se representa en una gráfica:
 En

abscisas se representan losvalores de las
diferentes longitudes de onda de la luz excitadora
y de la radiación fluorescente emitida.
 En ordenadas se reflejan los valores de sus
respectivas intensidades de fluorescencia.
También suele representarse la absorbancia de la
sustancia que se estudia cuando se varía la
longitud de onda de la radiación excitadora.

ESPECTRO DE
EXCITACIÓN

ESPECTRO DE
EXCITACIÓN


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Cuanto mayor sea la absorción de una sustancia,
mayor será la intensidad de la radiación fluorescente
emitida.
No existe emisión fluorescente antes y después de
ciertos valores de longitud de onda de la radiación
excitadora.
La intensidad de la radiación fluorescente emitida es
proporcional a la absortividad molar de la sustancia.
La radiación fluorescente tiene siempre unaenergía
menor que la radiación excitadora.

RELACIÓN ENTRE INTENSIDAD DE
FLUORESCENCIA Y CONCENTRACIÓN
DE LA SUSTANCIA QUE LA EMITE


Para poder determinar concentraciones
desconocidas es necesario establecer una
relación entre la intensidad de la radiación
fluorescente emitida por una determinada
sustancia y la concentración de la misma.

RELACIÓN ENTRE INTENSIDAD DE
FLUORESCENCIAY CONCENTRACIÓN
DE LA SUSTANCIA QUE LA EMITE


La intensidad de la radiación emitida (F) es
proporcional a la energía absorbida por la sustancia
(Ii-It); es decir:

F = Φ (Ii-It)

Ii: intensidad de la luz incidente
It: intensidad de la luz transmitida
Φ: factor de proporcionalidad
(rendimiento cuántico)

RELACIÓN ENTRE INTENSIDAD DE
FLUORESCENCIA Y CONCENTRACIÓN
DE LA SUSTANCIAQUE LA EMITE


Si tenemos en cuenta la Ley de Lambert-Beer:
It = Ii.e-εlc

Donde la fracción de luz transmitida es:

It/Ii = e-εlc Y la fracción de luz absorbida:
1- It/Ii = 1-e-εlc Si se realiza la siguiente transformación:
(It-Ii)/Ii = 1-e-εlc Tendremos que:
Ii-It = Ii (1-e-εlc) Sustituyendo en la primera ecuación se
obtiene:

F = Φ. Ii . (1-e-εlc)

RELACIÓN ENTRE INTENSIDAD...