Frotis y Tinciones

FROTIS Y TINCIONES

 
Universidad Técnica de Manabí
Facultad de Ciencias de la Salud
Carrera de Medicina
Microbiología Práctica
Frotis y Tinciones

Por:
Cáceres Palma Lorena
Cantos Lucas Lilia
Delgado Zambrano Tamara
Espinoza Castro Valeria
Luque Loor Andy
Ng Moreira Manfung

Tercer Nivel “D”

Dra. Jully Román
Portoviejo – Manabí – Ecuador
Septiembre 2011 – Febrero 2012OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Permitir el conocimiento de las distintas técnicas de tinción para bacterias


OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Aprender la realización de un frotis bacteriano como punto inicial para la aplicación de las diferentes técnicas de tinción.
 Identificar los factores que influyen al momento de realizar una tinción.
 Diferenciar las diferentes técnicas de tinciónpara aplicar la más adecuada en el laboratorio.

PREPARACIÓN DE UN EXTENDIDO DE BACTERIAS “FROTIS”
Para realizar una tinción se debe hacer un extendido del material en un portaobjetos, lo que en nuestros medio se conoce como “frotis”, este se deja secar y luego se fija. En bacteriología la fijación usualmente se hace calentando a la llama. Lo cual coagula proteínas y adhiere el material a lalámina. En la fijación química se emplean sustancias que también pueden coagular proteínas, como el metanol, pero los más recomendados son los fijadores que se combinan con el material, como la formalina, que realiza enlaces peptídicos con los grupos aminos.
Objetivo
• Aprender a realizar frotis bacterianos para la realización de diferentes tinciones.
Materiales
• Cultivos de Escherichia coli yde Staphylococcus aureus en caldo nutritivo.
• Portaobjetos limpios.
• Agua destilada estéril (ADE).
Métodos
1. Tomar un portaobjetos limpio, flamear una de sus caras para eliminar la grasa y dejar enfriar. Si se trata de una lámina con un extremo esmerilado, usar el lado que presenta la cara esmerilada, a fin de que en ella se pueda escribir, con lápiz de grafito, la identificación requerida.Si se trata de una lámina no esmerilada la información debe escribirse con lápiz de cera o marcador indeleble, en un área de 1 a 2 cm, en uno de los extremos de la lámina. Siempre se debe identificar la preparación.
2. Marcar en el reverso de la lámina dos áreas circulares de aproximadamente 1 cm de diámetro, separadas entre sí por una distancia de 1 cm.
3. Esterilizar el asa bacteriológica enla llama del mechero, como se describió previamente. Dejar enfriar sin que roce ningún objeto, pues la contaminaría. Es conveniente trabajar con 2 asas, de manera que mientras se esteriliza una, la otra se esté enfriando.
4. Con el asa fría colocar una gotita de ADE sobre las áreas circulares demarcadas en la lámina, obviamente sobre la cara flameada. De nuevo esterilizar el asa.
5. Con el asaestéril y fría colocar los microorganismos que se van a teñir, suspenderlos en la gotita de agua que previamente se había colocado. Si se trata de un caldo de cultivo, tomar una pequeña cantidad del caldo con el asa y mezclarlo con el agua. Mover el asa en forma rotatoria de manera que se extienda la preparación sobre el área demarcada. Cuando se trate de colonias aisladas en un medio sólido,tocar la superficie de una colonia con la aguja bacteriológica o con el borde del anillo del asa y hacer la operación descrita; nunca arrancar la colonia completa, pues podría arrasar otros microorganismos que podrían estar creciendo bajo ella. El problema enfrentado con más frecuencia es colocar un exceso de microorganismos (suspensión lechosa), esto provoca una tinción defectuosa o forma unamancha opaca imposible de observar al microscopio. Tener presente que la suspensión de bacterias no sea muy densa; por el contrario, debe ser transparente.
6. Dejar secar la preparación al aire y luego fijarla al calor, al pasarla ligeramente por la llama, sin calentar excesivamente. Una buena indicación del grado de calentamiento, es tocar el reverso de la lámina con la mano sin quemarse. Esta...