genetica molecular cientificos

DESCIFRAMIENTO DEL CÓDIGO GENÉTICO
La asignación de un aminoácido a cada triplete o el desciframiento de la clave genética, se llevó a cabo fundamentalmente gracias al esfuerzo de tres grupos de investigación, el grupo de M. W. Nirenberg, el grupo de S. Ochoa y el equipo de H. G. Khorana. Parece lógico pensar que el desciframiento del código genético se debería haber realizado comparando lassecuencia de nucleótidos de un gen y la de aminoácidos del polipéptido codificado por dicho gen. Sin embargo, en la época en la que se realizaron estos trabajos no era posible todavía obtener la secuencia de los ácidos nucleicos.



Severo Ochoa
Marshall W. Nirenberg
Har Gobind Khorana
La mayoría de los trabajos realizados por estos tres grupos de investigación consistieron en sintetizarARN mensajeros (ARN-m) para utilizarlos posteriormente como mensajeros artificiales en un sistema acelular de traducción "in vitro". Estos sistemas acelulares de traducción "in vitro" procedían de la bacteria E. coli y contenían todo lo necesario para llevar a cabo la traducción: ribosomas, todos los ARN transferentes, aminoácidos, enzimas, etc. Sin embargo, a estos sistemas acelulares se lesquitaban los ARN mensajeros de E. coliy se les añadía un ARN sintetizado artificialmente. En estos sistemas acelulares se sintetizaba un polipéptido.
Posteriormente, se comparaba la secuencia del ARN -m sintético utilizado en el experimento con la secuencia de aminoácidos del polipéptido producido.
La puesta a punto de estas técnicas requería poder sintetizar ARN-m de forma enzimática (grupo deOchoa) o de  forma química (grupo de Khorana) y conseguir un sistema acelular estable para sintetizar proteínas (grupo de Nirenberg).
En esencia, los grupos de investigación anteriormente mencionados realizaron los siguientes tipos de esperimentos:
Utilización de homopolímeros.
Uso de copolímeros.
Empleo de polímeros de secuencia conocida.
Técnica de incorporación de ARN transferente.UTILIZACIÓN DE HOMOPOLÍMEROS
Un homopolímero es un ARN sintético que solamente contiene un tipo de ribonucleótido. Por ejemplo, el ARN sintético UUUUUUUUUUUUU.......
Gruberg-Manago y Ochoa (1955) aislaron a partir de timo de ternera un ezima denominada Polirribonucleótido fosforilasa que tenía la capacidad de sintetizar ARN a partir de ribonucleósidos difosfato y sin necesidad de molde. Este enzimaiba tomando al azar los ribonuclkeñosidos del medio para originar un ARN.
Matthei y Nirenberg (1961) consiguieron sintetizar polipéptidos "in vitro" añadiendo un ARN sintético de secuencia conocida a un sistema acelular estable de traducción. Usando la Polirribonucleótido fosforilasa sintetizaron poli-uridílico (poli-U: UUUUUUUUUUUUUU...). Cuando emplearon este ARN sintético en su sistema acelularde traducción daba lugar a la formación de un polipéptido que solamente contenía el aminoácido fenilalanina (Poli-fenilalanina: phe-phe-phe-phe-..). Por tanto, el triplete UUU codificaba para fenilalanina (phe). También comprobaron que el ARN síntético Poli C (Poli-citidílico: CCCCCCCCCC....) daba lugar a un polipéptido que contenía solamente prolina (Poli-prolina: pro-pro-pro-pro-pro-...), portanto, el codón CCC significaba prolina (pro).
Poco tiempo después, Ochoa sintetizó Poli-adenílico (Poli-A: AAAAAAAAA....) y observó que el polipéptido que aparecía solamente tenía el aminoácido lisina (Poli-lisina: lys-lys-lys-lys-....). Por consiguiente el triplete AAA codificaba para el aminoácido lisina (lys). También corroboró que el Poli-C daba lugar a Poli-prolina. El ARN Poli-guanílicono producía proteína alguna, probablemente debido a que adquiría una estructura terciaría helicoidal que impedía su traducción a proteína.
Triplete
Aminoácido
CCC
prolina
UUU
fenilalanina
AAA
lisina
USO DE COPOLÍMEROS
El siguiente paso fue la utilización de copolímeros, es decir, de ARN sintéticos que contenían más de un más de un ribonucleótido distinto. Para ello emplearon la...