GLUCOLISIS

Objetivos:
El alumno determinará que mecanismo o mecanismos de transporte de glucosa efectúa a través de la membrana la levadura Saccharomyces cerevisiae.
En base a estos resultados, también determinará:
Qué factores intervienen en este tipo de transporte.
Como se comporta este transporte ante inhibidores y agentes desacoplantes.
Las condiciones optimas para que esta levadura realice untransporte óptimo a través de su membrana.

Hipótesis:
La levadura Saccharomyces cerevisiae lleva acabo de manera pasiva facilitada el transporte de nutrientes a través de su membrana. La temperatura ambiente aumenta la fluidez de esta y facilita el transporte, mientras que los inhibidores que actúen a nivel proteico y los agentes desacoplantes de la cadena de transporte de electronesterminaran por suprimir o minimizar esta actividad transportadora.
Diseño experimental:








Registro de datos:
Tabla 1. Curva tipo de glucosa (medida a una absorbancia de 540 nm):
µg de glucosa
Absorbencia (540 nm)
0
0
100
0.166
200
0.400
300
0.636
400
0.891
500
1.125

Tabla 2. Determinación de glucosa residual (respecto al tiempo):

Datos de A obtenidos usando comoblanco el tubo 1 de la curva tipo.
Manejo de datos:
Para poder trabajar los datos es necesario conocer la ecuación de la recta de la curva tipo para glucosa.








Figura 1. Curva tipo de glucosa por el método del DNS.

Se despejara “x” de la ecuación de la recta, para poder conocer la concentración en µg/ml de cada uno de los tratamientos respecto al tiempo.

Despeje:
Con estaecuación calculamos la concentración de glucosa/ml para cada uno de los datos de la tabla 2.

Ejemplo:
Matraz 1, 0 min: A = 0.815 (Tomando en cuenta que A obtenida será el valor “y” en la ecuación).
= 370.86µg/ml
De la cual obtuvimos la siguiente tabla donde se expone la concentración de glucosa en µg/ml de cada uno de los tratamientos realizados:

Tabla 3. Concentración de glucosa enµg/ml de cada uno de los tratamientos.
µg de glucosa residual
Matraz No.
0’
10’
20’
30’
1
370.86
350
401.3
335.65
2
392.60
267.82
137.39
55.21
3
141.3
106.52
68.26
16.95
4
404.78
381.30
372.17
340.86
5*
20.43
19.56
17.39
16.52

5*: serie de tubos control.
La concentración obtenida de los tubos control, se restara a cada uno de los tubos del resto de las seriesrespectivamente.
Ejemplo:
Matraz 1 min 0 – Matraz 5 min 0 = µg/ml 370.86-20.43= 350 µg/ml
Pero el valor obtenido aún esta expresado en µg/ml, sin embargo nosotros requerimos que las cantidades estén en mg/ml, tomando en cuenta la alícuota empleada. Por este motivo a cada uno de los valores obtenidos se multiplicara por (1/alícuota) y posteriormente este resultado se dividiráentre 1000, para convertirlos en mg/ml.
Ejemplo:



Esta misma operación se aplicara a cada uno de los valores de la tabla 3, obteniendo:
Tabla 4. Concentración de Glucosa residual (mg/ml).
Matraz No.
0’
10’
20’
30’
1
1.167
1.055
1.224
1.012
2
1.189
0.739
0.383
0.1236
3
0.406
0.293
0.172
0.0037
4
1.284
1.208
1.185
1.083

*La serie de tubos no.5 fueron los controlesempleados. Los cuales fueron restados a cada una de las lecturas obtenidas para cada tratamiento, razón por la cual ya no se incluyen en esta tabla.
Para calcular la concentración de glucosa consumida en mg/ml será necesario restar cada uno de los valores de la tabla 4 a la concentración de glucosa inicial. Esta concentración inicial será el valor de la columna del tiempo 0’ dado que en estetiempo no se tenía consumo de glucosa.
mg glucosa inicial - mg glucosa residual = mg de glucosa consumida

Ejemplo:
Matraz 1, min 10: 1.167-1.055= 0.112 mg/ml glucosa consumida.
Obteniendo la siguiente tabla:
Tabla 5. Concentración de glucosa (mg/ml) consumida por Saccharomyces cerevisiae respecto al tiempo.






Obteniendo estos resultados procedemos a graficar cada uno de los...