guia de laboratorio
Páginas: 6 (1412 palabras)
Publicado: 12 de mayo de 2014
GUÍA DE LABORATORIO NÚMERO 12
ImmunoComb II ®-Chagas Ab
Prueba rápida para la detección cualitativa de los anticuerpos del Trypanosoma cruzi presentes en suero y plasma humano.
OBJETIVOS
Conocer el fundamento de la técnica de immunocomb y su empleo en el diagnóstico de la enfermedad de Chagas.
Realizar la técnica de immunoComb para la detección de anticuerpos contra elTrypanosoma cruzi.
Comprender en qué consiste la enfermedad de Chagas , su agente causal, el cuadro clínico y diagnóstico
MARCO TEORICO
Las tripanosomosis humanas son producidas por protozoos flagelados de la familia Trypanosomatidae y es transmitida por artrópodos hematófagos. Este parásito puede ser trasmitido por diferentes vías, ya sea por el contacto con heces de insectos triatominos, por la víatransplacentaria o a través de transfusión de sangre no controlada. Existen dos enfermedades distintas con localizaciones geográficas diferentes, la americana y la africana. La tripanosomiasis americana o enfermedad de Chagas es una infección parasitaria producida por el Trypanosoma cruzi.
El diagnóstico de laboratorio depende del estadio en el cual se encuentre la enfermedad; durante la faseaguda, el diagnóstico se efectúa directamente mediante la comprobación de los parásitos en sangre o por métodos inmunológicos que detecten anticuerpos específicos; durante la fase crónica, se pueden usar métodos inmunológicos como la reacción de aglutinación de látex, hemaglutinación, immunocomb, aglutinación directa, inmunofluorescencia y Elisa.
FUNDAMENTO DEL METODO
La prueba de ImmunoComb® IIChagas Ab constituye un ensayo inmunoenzimático en fase sólida indirecto. La fase sólida está constituida por un peine con 12 proyecciones (dientes).
Cada diente es sensibilizado en dos puntos:
Punto superior: inmunoglobulina humana (control interno).
Punto inferior: proteínas recombinantes de Trypanosoma cruzi.
La bandeja de desarrollo tiene 6 filas (A-F) de 12 pocillos. Cada filacontiene una solución reactiva lista para ser utilizada en cada etapa del ensayo. El test es realizado paso a paso, pasando el Peine de fila en fila y con un periodo de incubación en cada una de las etapas.
Para comenzar el test, las muestras de suero o plasma deben ser añadidas al diluyente en los pocillos de la fila A de la bandeja de desarrollo. Luego, el Peine es insertado dentro de lospocillos de la fila A. Los anticuerpos anti T. cruzi, en caso de estar presentes en las muestras, se combinarán específicamente a las proteínas recombinantes en los puntos inferiores del diente del Peine.
En forma simultánea, las inmunoglobulinas existentes en las muestras serán capturadas por los anticuerpos a la inmunoglobulina antihumana en el punto superior (Control interno). Los componentes nocombinados son lavados en la fila B. En la fila C, las inmunoglobulinas específicas capturadas en los dientes reaccionarán con anticuerpos de clase lg antihumanos polivalentes conjugados con fosfatasa alcalina. En las dos filas siguientes, los componentes no combinados son removidos por medio de lavado. En la fila F, la fosfatasa alcalina ligada reaccionará con componentes cromogénicos. Losresultados pueden verse como puntos de color azul grisáceo en la superficie de los dientes del Peine.
PRE-LABORATORIO
1. Realice un esquema en el que explique el fundamento de la prueba de immunocoomb II Chagas AB .
2. Dibuje y explique las principales características del Trypanosoma cruzi
2. Mencione los factores de virulencia o patogenicidad del Trypanosoma cruzi
3. Cuáles son lascaracterísticas clínicas de la enfermedad de chagas?
MATERIALES
Elementos de bioseguridad (bata, gorro, guantes, tapaboca, gafas)
Toallas de papel
Micropipetas de 10-50-1000µl
Puntas
Recipiente con hipoclorito
Kit inmunocomb Chagas Ab.
Tijeras.
Cronómetro
PROCEDIMIENTO
Preparación de la prueba: Lleve todos los componentes, bandejas de desarrollo, peines, reactivos y muestras a temperatura...
GUÍA DE LABORATORIO NÚMERO 12
ImmunoComb II ®-Chagas Ab
Prueba rápida para la detección cualitativa de los anticuerpos del Trypanosoma cruzi presentes en suero y plasma humano.
OBJETIVOS
Conocer el fundamento de la técnica de immunocomb y su empleo en el diagnóstico de la enfermedad de Chagas.
Realizar la técnica de immunoComb para la detección de anticuerpos contra elTrypanosoma cruzi.
Comprender en qué consiste la enfermedad de Chagas , su agente causal, el cuadro clínico y diagnóstico
MARCO TEORICO
Las tripanosomosis humanas son producidas por protozoos flagelados de la familia Trypanosomatidae y es transmitida por artrópodos hematófagos. Este parásito puede ser trasmitido por diferentes vías, ya sea por el contacto con heces de insectos triatominos, por la víatransplacentaria o a través de transfusión de sangre no controlada. Existen dos enfermedades distintas con localizaciones geográficas diferentes, la americana y la africana. La tripanosomiasis americana o enfermedad de Chagas es una infección parasitaria producida por el Trypanosoma cruzi.
El diagnóstico de laboratorio depende del estadio en el cual se encuentre la enfermedad; durante la faseaguda, el diagnóstico se efectúa directamente mediante la comprobación de los parásitos en sangre o por métodos inmunológicos que detecten anticuerpos específicos; durante la fase crónica, se pueden usar métodos inmunológicos como la reacción de aglutinación de látex, hemaglutinación, immunocomb, aglutinación directa, inmunofluorescencia y Elisa.
FUNDAMENTO DEL METODO
La prueba de ImmunoComb® IIChagas Ab constituye un ensayo inmunoenzimático en fase sólida indirecto. La fase sólida está constituida por un peine con 12 proyecciones (dientes).
Cada diente es sensibilizado en dos puntos:
Punto superior: inmunoglobulina humana (control interno).
Punto inferior: proteínas recombinantes de Trypanosoma cruzi.
La bandeja de desarrollo tiene 6 filas (A-F) de 12 pocillos. Cada filacontiene una solución reactiva lista para ser utilizada en cada etapa del ensayo. El test es realizado paso a paso, pasando el Peine de fila en fila y con un periodo de incubación en cada una de las etapas.
Para comenzar el test, las muestras de suero o plasma deben ser añadidas al diluyente en los pocillos de la fila A de la bandeja de desarrollo. Luego, el Peine es insertado dentro de lospocillos de la fila A. Los anticuerpos anti T. cruzi, en caso de estar presentes en las muestras, se combinarán específicamente a las proteínas recombinantes en los puntos inferiores del diente del Peine.
En forma simultánea, las inmunoglobulinas existentes en las muestras serán capturadas por los anticuerpos a la inmunoglobulina antihumana en el punto superior (Control interno). Los componentes nocombinados son lavados en la fila B. En la fila C, las inmunoglobulinas específicas capturadas en los dientes reaccionarán con anticuerpos de clase lg antihumanos polivalentes conjugados con fosfatasa alcalina. En las dos filas siguientes, los componentes no combinados son removidos por medio de lavado. En la fila F, la fosfatasa alcalina ligada reaccionará con componentes cromogénicos. Losresultados pueden verse como puntos de color azul grisáceo en la superficie de los dientes del Peine.
PRE-LABORATORIO
1. Realice un esquema en el que explique el fundamento de la prueba de immunocoomb II Chagas AB .
2. Dibuje y explique las principales características del Trypanosoma cruzi
2. Mencione los factores de virulencia o patogenicidad del Trypanosoma cruzi
3. Cuáles son lascaracterísticas clínicas de la enfermedad de chagas?
MATERIALES
Elementos de bioseguridad (bata, gorro, guantes, tapaboca, gafas)
Toallas de papel
Micropipetas de 10-50-1000µl
Puntas
Recipiente con hipoclorito
Kit inmunocomb Chagas Ab.
Tijeras.
Cronómetro
PROCEDIMIENTO
Preparación de la prueba: Lleve todos los componentes, bandejas de desarrollo, peines, reactivos y muestras a temperatura...
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