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MANUAL DE LA ASIGNATURA INMUNOFISIOLOGÍA - Práctica 2: Observación de células sanguíneas y
recuento de leucocitos

Práctica 2

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Obsevación y recuento de células sanguíneas
Semestre B-2010

Introducción
En la sangre se encuentran los leucocitos o glóbulos blancos que son las células móviles del
sistema inmunitario. Todos ellos difieren en cuanto a su función y morfología. Los leucocitos
nodesempeñan sus funciones cuando se encuentran en sangre, sino cuando abandonan
ésta y entran a los tejidos linfoides o a las zonas donde hay inflamación intensa. En este
sentido, la sangre es un medio de transporte, que le permite a las células sanguíneas
recircular entre los diferentes tejidos del cuerpo. Normalmente en sangre se encuentran
cinco tipos de leucocitos: monocitos, linfocitos,neutrófilos, eosinófilos y basófilos. Además
de estas células, se encuentran presentes las plaquetas, que son fragmentos
citoplasmáticos de los megacariocitos que se asientan en la médula ósea.
Los leucocitos se estudian en preparaciones coloreadas por dos razones: a fin de
determinar la apariencia normal o anormal de las células y sus porcentajes relativos en el
diagnóstico de ciertas enfermedades. Elrecuento de eritocitos y eucocitos es uno de los
métodos de rutina

Objetivos:
1. Adiestrarse en la preparación y tinción de frotis sanguíneo
2. Describir la morfología de los diferentes tipos de células sanguíneas observadas en
el microscopio óptico
3. Adiestrarse en el manejo y uso del hemocitómetro
TÉCNICA DEL FROTIS DE SANGRE
Las células de la sangre se estudian comúnmente en el laboratorio mediantepreparaciones
denominadas “frotis sanguíneo” o “extendido sanguíneo”. Para ello se prepara una fina
película de células sanguíneas sobre un portaobjeto a fin de obtener una capa delgada de
células. Después de colorear las preparaciones se observa su morfología al microscopio
óptico.
Materiales requeridos para el frotis
3 Portaobjetos limpios.
Lanceta estéril
etanol (para limpiar las láminas)metanol (para fijar la muestra de sangre)
Gasa
Lápiz de diamante
Colorante Giensa
Buffer Sorensen
Para colorear 2 láminas con frotis sanguíneo, mezcle en un recipiente de vidrio, 9 ml de
Buffer Sorensen pH 7.2 y 1ml de colorante Giensa. Tiempo de coloración 20 minutos.
PROCEDIMIENTO
1. Lave muy bien tres portaobjetos. Si es necesario límpielos con etanol/éter utilizando un
trozo de gasa.

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recuento de leucocitos

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2. Ubique el sitio de toma de la muestra en la parte lateral del dedo medio o anular de la
mano izquierda donde es menos sensible que en la punta, como lo indica el esquema.
3. Limpie el sitio donde se tomará la muestra de sangre, utilizando una gasa empapada
con etanol y luego séquelo congasa.
4. Con una lanceta con un movimiento firme y rápido realizar una pnución en un pulgar.
5. Limpie la primera gota de sangre con gasa.
6. Con la mano derecha tome un portaobjeto y sosténgalo por los bordes. Con la mano
izquierda presione el dedo y deje fluir una gota pequeña de sangre (2mm de diámetro).
Coloque una gota de sangre sobre el portaobjeto en el centro de uno de los extremos de
lalámina.
7. Coloque un segundo portaobjeto apoyado sobre el otro por delante de la gota de sangre
en ángulo de 45º, y se hace retroceder hasta que el borde coincida con la gota, que se
extenderá por capilaridad por todo el borde. Antes de que la sangre se extienda por los
extremos del porta, se hace deslizar por el porta hacia delante con movimiento firme y
rápido, elevando la mano derecha antes de queel porta que se desliza llegue al final.
Mientras mayor sea el ángulo que forman las dos láminas, mayor será el espesor de la
capa de células.

gota de
sangre

Figura 1:Esquema de la disposición de los portaobjetos para realizar el extendido sanguíneo

8. Deje secar la muestra durante 5 minutos. Fije con metanol (1 minuto). Deje secar
nuevamente (10 minutos). Coloree con colorante Giensa (20...