inmunoensayos

Competencia: Entender el fundamento de la reacción antígeno‐anticuerpo y su aplicación

PRÁCTICA 3

TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS
I. INTRODUCCIÓN
La reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ab) es el resultado de las interacciones no
covalentes (electrostáticas, hidrofóbicas y fuerzas de Van der Waals), por lo tanto es
reversible. Esta reacción se lleva a cabo entre el sitio activo del Ab (parátopo) ysu
determinante antigénico específico (epítopo). Los anticuerpos son capaces de expresar
una especificidad notable y pueden distinguir pequeñas diferencias como: estructura
primaria, carga eléctrica, configuración óptica y conformación estérica.
La reacción Ag-Ab posee dos características intrínsecas, la afinidad y la avidez. La
afinidad es la fuerza de unión Ag-Ab individual (un sólo sitio deunión y un sólo
determinante antigénico) y es la suma de las fuerzas de atracción y repulsión (número
y clase de interacciones). Figura 1.

Figura 1. Afinidad de la reacción Ag-Ab. Cuando la fuerza de atracción es mayor que la
fuerza de repulsión se da una reacción con afinidad alta, por el contrario cuando la
fuerza de atracción es menor que la fuerza de repulsión la reacción posee unaafinidad
baja.

La avidez es la fuerza de unión total de un Ag con un Ab, tomando en cuenta por lo
menos 2 sitios de unión. Por ejemplo, el anticuerpo IgM por ser pentamérico tiene
mayor avidez que el anticuerpo IgG que es monomérico. Figura 2.

Figura 2. Avidez de la reacción Ag-Ab. La avidez es la suma de las afinidades y depende
del número de sitios activos del Ab.

LABORATORIO DEINMUNOLOGÍA 2014‐1

Competencia: Entender el fundamento de la reacción antígeno‐anticuerpo y su aplicación

Aunque las reacciones Ag-Ab son específicas, existen casos en los que se dan
reacciones cruzadas debido a que dos Ag comparten determinantes antigénicos o
tienen similitud estructural. Figura 3. En el diagnóstico, las reacciones cruzadas dan
falsos positivos, y pueden proteger a unindividuo contra patógenos a los que no ha
sido expuesto y también participan en el desarrollo de enfermedades autoinmunitarias.

Figura 3. Reacción cruzada. El Ag A y B comparten el epítopo, mientras que en el Ag C el
epítopo es similar a A y B, por lo que el Ab específico para A reaccionará en los tres
epítopos.

Se han desarrollado diversas pruebas inmunológicas o inmunoensayos, para detectarla presencia de anticuerpos o de antígenos, lo cual es de gran utilidad en el
diagnóstico, terapéutica e investigación biomédica. Algunas se basan en reacciones de
precipitación y aglutinación.
Precipitación: Es una reacción Ag-Ab, en la cual el Ag se encuentra soluble y forma
un complejo Ag-Ab insoluble, constituyendo una red tridimensional que precipita
visiblemente en medio líquido osemisólido. Esta reacción requiere una incubación de
48 horas a 37ºC. Figura 4.

Figura 4. Precipitación en agar. Las flechas muestran las bandas de precipitación
formadas por la reacción Ag-Ab.

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Aglutinación: Es una reacción Ag-Ab, en la cual el Ag se encuentraparticulado
(eritrocitos, bacterias o partículas sintéticas) formando un complejo Ag-Ab insoluble,
constituyendo una red tridimensional que aglutina visiblemente. Esta reacción es
instantánea y se lleva a cabo a temperatura ambiente. Figura 5.

Figura 5. Aglutinación de eritrocitos. Las flechas muestran los pozos donde hay
aglutinación.

Precipitado Ag-Ab

La reacción de un Ab con su Ag homólogoproduce complejos Ag-Ab cuando la
concentración es máxima y ambos reactantes están en equivalencia. Esta zona de
equivalencia se observa en las pruebas de precipitación y aglutinación. La formación de
estos inmunocomplejos tiene importancia diagnóstica y clínica. Figura 6.

Zona de
exceso de Ab

Prozona

Zona de
equivalencia

Concentración de Ag

Zona de
exceso de Ag

Postzona...