Inseminacion Artificial

Fosfatasas Alcalina
optimizada
Para la determinación de la actividad de fosfatasa alcalina en suero SIGNIFICACION CLINICA La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo. Hidroliza los monoésteres del ácido ortofosfórico en medio alcalino. En el adulto proviene en parte del hígado (fracción termoestable) y en parte del hueso, sistema reticuloendotelial y vascular(fracción termolábil), dando lugar a distintas isoenzimas. La actividad sérica de fosfatasa alcalina ósea, en condiciones normales, alcanza su mayor actividad en los niños en edad de crecimiento (llegando a triplicar los niveles del adulto) debido a que esta isoenzima se localiza en los osteoblastos (relacionados con la calcificación y formación de estructuras óseas). También es fisiológico elaumento que se produce al final del primer trimestre del embarazo, a expensas de la isoenzima placentaria que en este período alcanza niveles máximos (aproximadamente el doble de los valores normales). Entre las patologías que afectan la actividad sérica de fosfatasa alcalina, se pueden citar: carcinomas metastásicos en hígado y en hueso (productores de enzima), colestasis biliar, fenómenososteoblásticos, trastornos de malabsorción acompañados de lesiones ulcerosas (donde la deficiencia de vitamina D produce osteomalacia con el consecuente aumento de fosfatasa alcalina ósea) e incluso lesiones en vías de reparación tales como infarto agudo de miocardio, infarto pulmonar o renal. FUNDAMENTOS DEL METODO La fosfatasa alcalina desdobla al fenilfosfato de sodio en medio alcalino tamponado conaminometil propanol (AMP). El fenol liberado se determina por reacción con 4-amino-antipirina y ferricianuro como agente oxidante. El color desarrollado es directamente proporcional a la actividad enzimática y se mide a 520 nm. REACTIVOS PROVISTOS Buffer: 4-aminoantipirina 29 mmol/l en solución de aminometil propanol 3 mol/l pH 10 (a 37oC). NaFF: fenilfosfato de sodio, 1,4 mmoles. Reactivo de color:ferricianuro de potasio, 10 mmol/l. Standard: solución de fenol equivalente a 200 UI/l. REACTIVOS NO PROVISTOS Agua destilada. INSTRUCCIONES PARA SU USO Sustrato; preparación: transferir el contenido del frasco de NaFF volcándolo directamente en el frasco de Buffer y mezclándolo hasta disolución completa (concentración final 14 mM). Anotar en el rótulo la fecha de preparación. Reactivo de color;preparación: disolver el contenido del envase en 500 ml de agua destilada. Rotular y colocar fecha de preparación. Standard: listo para usar. PRECAUCIONES Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro". El Reactivo de color es tóxico. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Los Reactivos Provistos son estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.Sustrato: una vez preparado es estable durante 5 meses en refrigerador (2-10oC). Reactivo de color: una vez preparado es estable durante 5 meses a temperatura ambiente y al abrigo de la luz. INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS Valores de Blanco de reactivos mayores a 0,120 D.O. indican contaminaciones, debiéndose descartar los reactivos. MUESTRA Suero a) Recolección: debe usarseúnicamente suero fresco, no hemolizado. b) Aditivos: no se requieren. c) Sustancias interferentes conocidas: los anticoagulantes producen inhibición de la reacción en un 50 a 90%. Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las drogas en el presente método. d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: si la determinación no puede ser efectuada en un plazo de 6 horas, la muestradebe conservarse congelada (- 4oC) ya que a temperatura ambiente o en refrigerador (2-10oC) hay aumento de actividad de 30 a 50% en 24 horas. MATERIAL REQUERIDO (no provisto) - Espectrofotómetro o fotocolorímetro. - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados. - Tubos de ensayo o de fotocolorímetro. - Probeta. - Baño de agua a 37oC. - Reloj o timer.
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