Lab electroforesis y cromatografia.
Páginas: 14 (3480 palabras)
Publicado: 9 de septiembre de 2013
TABLA DE CONTENIDOS
1. Electroforesis.
1.1 Marco teórico
1.2 Objetivos
1.2.1 Objetivo General
1.3 Resultados
1.4 Análisis
1.5 Discusión
1.6 Conclusiones
1.7 Bibliografía
2. Cromatografía
2.1 Marco teórico
2.2 Objetivos
2.2.1 Objetivo General
2.3 Resultados
2.4 Análisis
2.5 Discusión
2.6 Conclusiones
2.7 Bibliografía
1. Electroforesis
1.1.Marco teórico
La electroforesis (“electro” electricidad, “foresis” trasladar) es un método en el que se aplica corriente eléctrica con el objetivo de separar moléculas de determinada sustancia de acuerdo a su tamaño y polaridad, a través de una matriz gelatinosa.
El proceso consiste en suministrar voltaje controlado a determinada mezcla ionizada y con carga neta, esperando como resultadodespués de dejar pasar determinada cantidad de tiempo que las moléculas de ésta sean atraídas hacia el polo con carga contraria, hacia el ánodo los cargados negativamente y hacia el cátodo los cargados positivamente.
Durante el transcurso de la electroforesis intervienen fuerzas adicionales, tales como la fuerza de fricción reflejada en la oposición que ejerce el solvente y la fuerza cinéticapropia de las moléculas que adicionalmente tiende a ascender por el cambio de temperatura después de aplicarse la corriente eléctrica.
La suma de todas estas fuerzas origina que las moléculas de la mezcla no se desplacen de manera homogénea y para mejorar el movimiento de éstas se implementa el uso de un gel que oponga más resistencia en el desplazamiento.
La electroforesis en gel es ungrupo de técnicas empleadas por los científicos para separar moléculas basándose en propiedades como el tamaño, la forma o el punto isoeléctrico. La electroforesis en gel se utiliza generalmente con propósitos analíticos, pero puede ser una técnica preparativa para purificar moléculas parcialmente antes de aplicar una espectroscopia de masas, una PCR, una clonación o una secuenciación de ADN1.Existen varios tipos de electroforesis y la implementada durante esta sesión de práctica fue la conocida como electroforesis en gel de agarosa que es principalmente utilizada para separar tanto ácidos nucleicos como proteínas.
La agarosa (1.5 %) es un polisacárido extraído de las algas, cuya disolución generalmente tiene como característica el poder permanecer líquido hasta por encima de los50°C y cuando se enfría forma un gel semisólido que es usado como colchón para aplicar las muestras.
Por medio de la electroforesis con gel de agarosa se busca separar la proteína basado en la carga molecular neta, el tamaño y otras propiedades físicas, esperando que por acción de la corriente eléctrica aplicada, las moléculas atraviesen la placa de gel y al final de su recorrido por medio deel uso de colorantes específicos se puedan teñir las moléculas sujetas a la separación para hacerlas visibles.
La electroforesis con gel de agarosa tiene como ventaja la simpleza de su desarrollo, ya que el gel es fácilmente vertido y no desnaturaliza las muestras, además permite que éstas puedan ser recuperadas.
Para lograr los resultados esperados en la elaboración de esta técnica deseparación es importante tener en cuenta varios factores, uno indispensable es la aplicación adecuada de carga eléctrica, a bajo voltaje la migración de las moléculas será proporcional a éste, sin embargo si es aplicada una potencia elevada la movilidad de los fragmentos de alto tamaño molecular se incrementa. Por lo tanto, el rango de separación efectiva en los geles de agarosa decrece cuando seeleva el voltaje aplicado2.
Las proteínas no tienen una estructura predecible como los ácidos nucleicos, y por tanto sus velocidades de migración no son similares entre ellas. Incluso puede que no migren ni al aplicar una fuerza electromotriz (al encontrarse en su punto isoeléctrico). En estos casos, las proteínas se desnaturalizan mediante la adición de un detergente como el dodecilsulfato...
1. Electroforesis.
1.1 Marco teórico
1.2 Objetivos
1.2.1 Objetivo General
1.3 Resultados
1.4 Análisis
1.5 Discusión
1.6 Conclusiones
1.7 Bibliografía
2. Cromatografía
2.1 Marco teórico
2.2 Objetivos
2.2.1 Objetivo General
2.3 Resultados
2.4 Análisis
2.5 Discusión
2.6 Conclusiones
2.7 Bibliografía
1. Electroforesis
1.1.Marco teórico
La electroforesis (“electro” electricidad, “foresis” trasladar) es un método en el que se aplica corriente eléctrica con el objetivo de separar moléculas de determinada sustancia de acuerdo a su tamaño y polaridad, a través de una matriz gelatinosa.
El proceso consiste en suministrar voltaje controlado a determinada mezcla ionizada y con carga neta, esperando como resultadodespués de dejar pasar determinada cantidad de tiempo que las moléculas de ésta sean atraídas hacia el polo con carga contraria, hacia el ánodo los cargados negativamente y hacia el cátodo los cargados positivamente.
Durante el transcurso de la electroforesis intervienen fuerzas adicionales, tales como la fuerza de fricción reflejada en la oposición que ejerce el solvente y la fuerza cinéticapropia de las moléculas que adicionalmente tiende a ascender por el cambio de temperatura después de aplicarse la corriente eléctrica.
La suma de todas estas fuerzas origina que las moléculas de la mezcla no se desplacen de manera homogénea y para mejorar el movimiento de éstas se implementa el uso de un gel que oponga más resistencia en el desplazamiento.
La electroforesis en gel es ungrupo de técnicas empleadas por los científicos para separar moléculas basándose en propiedades como el tamaño, la forma o el punto isoeléctrico. La electroforesis en gel se utiliza generalmente con propósitos analíticos, pero puede ser una técnica preparativa para purificar moléculas parcialmente antes de aplicar una espectroscopia de masas, una PCR, una clonación o una secuenciación de ADN1.Existen varios tipos de electroforesis y la implementada durante esta sesión de práctica fue la conocida como electroforesis en gel de agarosa que es principalmente utilizada para separar tanto ácidos nucleicos como proteínas.
La agarosa (1.5 %) es un polisacárido extraído de las algas, cuya disolución generalmente tiene como característica el poder permanecer líquido hasta por encima de los50°C y cuando se enfría forma un gel semisólido que es usado como colchón para aplicar las muestras.
Por medio de la electroforesis con gel de agarosa se busca separar la proteína basado en la carga molecular neta, el tamaño y otras propiedades físicas, esperando que por acción de la corriente eléctrica aplicada, las moléculas atraviesen la placa de gel y al final de su recorrido por medio deel uso de colorantes específicos se puedan teñir las moléculas sujetas a la separación para hacerlas visibles.
La electroforesis con gel de agarosa tiene como ventaja la simpleza de su desarrollo, ya que el gel es fácilmente vertido y no desnaturaliza las muestras, además permite que éstas puedan ser recuperadas.
Para lograr los resultados esperados en la elaboración de esta técnica deseparación es importante tener en cuenta varios factores, uno indispensable es la aplicación adecuada de carga eléctrica, a bajo voltaje la migración de las moléculas será proporcional a éste, sin embargo si es aplicada una potencia elevada la movilidad de los fragmentos de alto tamaño molecular se incrementa. Por lo tanto, el rango de separación efectiva en los geles de agarosa decrece cuando seeleva el voltaje aplicado2.
Las proteínas no tienen una estructura predecible como los ácidos nucleicos, y por tanto sus velocidades de migración no son similares entre ellas. Incluso puede que no migren ni al aplicar una fuerza electromotriz (al encontrarse en su punto isoeléctrico). En estos casos, las proteínas se desnaturalizan mediante la adición de un detergente como el dodecilsulfato...
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