Lab



UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE NICARAGUA
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FISIOLÓGICAS
SECCIÓN DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR












INSTRUCTİVO DE PRÁCTICAS DE LABORATORIOS DE BIOQUÍMICA



PRIMER SEMESTRE 2015


COLECTIVO DOCENTE DE BIOQUÍMICA
Y BIOLOGÍA MOLECULAR








ENERO DEL 2015





Unidad I: Bioquímica Descriptiva
Práctica 3. Determinación de laactividad enzimática de la glucosa oxidasa


1. Temas de Autoestudio:

Aspectos generales de las enzimas
Cinética de Michaelis-Menten
Regulación enzimática
Inhibición enzimática

2. Objetivos

Evidenciar la actividad enzimática de la glucosa oxidasa.
Determinar la temperatura óptima de la glucosa oxidasa.
Establecer relación entre los aspectos teóricos y prácticos.
Adquirir habilidades en lasprácticas de laboratorio.

3. Introducción:
Las enzimas son moléculas de proteínas que tienen la capacidad de facilitar y acelerar las reacciones químicas que tienen lugar en los organismos vivos, disminuyendo el nivel de la "energía de activación" propia de la reacción.
Las enzimas no reaccionan químicamente con las sustancias sobre las que actúan (que se denominan sustrato), ni alteran elequilibrio de la reacción. Solamente aumentan la velocidad con que estas se producen, actuando como catalizadores. La velocidad de las reacciones enzimáticas dependen de la concentración de la enzima, de la concentración del sustrato (hasta un límite) y de la temperatura y el pH del medio.
4. Metodología

Se recomienda a los y las estudiantes leer y analizar todos los aspectos teóricos sobre enzimas, detal manera que le facilite la práctica, discusión y un mejor aprendizaje.

Al inicio del laboratorio se conformaran 3 estaciones de trabajo por cada subgrupo los cuales de manera alternada harán las actividades propuestas de tal forma que todos y todas las estudiantes participen en pro de un aprendizaje significativo y cooperativo.

Al finalizar el laboratorio se socializará los resultados y sediscutirán los mismos para finalmente ser evaluados.





5. Materiales, equipos y reactivos

Materiales: tubos de ensayo, gradillas, jeringas descartables, algodón y torniquete, agua destilada, alcohol
Equipos: Espectrofotómetro, centrifuga, Baño María, termómetro, micropipetas.

ESPECTROFOTÓMETRO UV-VIS> miden la longitud de onda en función de las radiaciones y reacciones químicas a las quese someten las diferentes muestras a analizar.
El instrumento utilizado en la espectrometría ultravioleta-visible se llama espectrofotómetro UV-Vis. Mide la intensidad de luz que pasa a través de una muestra (I), y la compara con la intensidad de luz antes de pasar a través de la muestra (Io). La relación I / Io se llama transmitancia, y se expresa habitualmente como un porcentaje (%T). Laabsorbancia (A) se basa en la transmisión:

A = - log (%T)

Las partes básicas de un espectrofotómetro son una fuente de luz (a menudo una bombilla incandescente para las longitudes de onda visibles, o una lámpara de arco de deuterio en el ultravioleta), un soporte para la muestra, una rejilla de difracción o monocromador para separar las diferentes longitudes de onda de la luz, y un detector. Eldetector suele ser un fotodiodo o un CCD. Los fotodiodos se usan con monochomadores, que filtran la luz de modo que una sola longitud de onda alcanza el detector. Las rejillas de difracción se utilizan con CCDs, que recogen la luz de diferentes longitudes de onda en píxeles.

Un espectrofotómetro puede ser único o de doble haz. En un instrumento de un solo haz (como el Spectronic 20), toda la luz pasa através de la célula muestra. La Io debe medirse retirando la muestra. Este fue el primer diseño, y todavía está en uso en la enseñanza y laboratorios industriales.

En un instrumento de doble haz, la luz se divide en dos haces antes de llegar a la muestra. Un haz se utiliza como referencia, y el otro haz de luz pasa a través de la muestra. Algunos instrumentos de doble haz tienen dos detectores...