laboratorio 1

Laboratorio n º1
Efecto de la fase móvil y de la temperatura en la resolución
cromatográfica
OBJETIVOS:
1. Reconocer los efectos que tiene la composición de la fase movil en fase reversa.
2.Reconocer los efectos que tiene la temperatura del horno en cromatografía gaseosa.

MATERIALES:
-

Filtros muestras a analizar.
Agua grado HPLC o mili-Q
Solventes Grado HPLC (Metanol)
FenolTolueno
Benceno
Cresol
Nitrofenol
etilbenceno

PROCEDIMIENTO:

PARA HPLC
Preparación fase móvil
Recuerde la importancia de la calidad de los solventes de la fase móvil y su filtración.
Más quepreparación usted deberá ver los solventes a usar y filtrarlos. El controlador del equipo
se encargara de hacer la mezcla de acuerdo a lo que se requiera.
Preparación de la muestra
1. Pesaralrededor de 100 mgr. de los analitos a analizar y llévelos a un volumen de
100 ml. En el caso de los líquidos lleve 100 ul a 100 ml.
2. Seleccione los analitos con los que ud. llevara a cabo su objetivo(min. 2 máx. 5)
3. Tome 1 ml de los analitos seleccionados y llévelos a 25 ml.
4. Filtre cada una de las muestras, es decir, los tres compuestos por separado y la
muestra combinada.
Determinacióncromatográfica para fase reversa
1. Simule los analitos a analizar con una proporción de agua / solvente deseado.
2. Estabilizar el equipo con fase móvil seleccionada (10 min) y con el detector UV a254 nm.
3. Inyectar 20 ul de cada analito.
4. Inyectar 20 ul de su muestra a analizar. Verifique con los tiempos de retención.
5. Calcule la polaridad de la fase móvil y la resolución.
6.Modifique la polaridad de la fase móvil. Estabilice el equipo (10 min) con la nueva
fase móvil seleccionada y con el detector UV a 254 nm.
7. Inyectar 20 ul de su muestra a analizar. ¿Qué cambios observaal variar la fase
móvil?

Ing. Cristina Morales

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PARA CG
Preparación de la muestra
1. Prepare las siguientes mezclas de tolueno y benceno, usando etilbenceno como estándar
interno....