laboratorio de analisis clinico

MODULO I°: Métodos de Estudios
TECNICAS HISTOLOGICAS:
DEFINICION: Es el conjunto de operaciones que se somete un material organizado para hacer posible su estudio por medio del microscopio, posibilitando la observación de las estructuras no visibles al ojo humano.
METODOS HISTOLOGICOS:

1-Examen inmediato o in vivo:
a) En fresco: animales unicelulares y célulaslibres.

b) Coloración vital: usando soluciones de
colorantes no tóxicos (colorantes vitales),
coloración intravital o in vivo, y la coloración
supravital, donde pueden colorearse células
libres o porciones de órganos.
2- Examen mediato o post-morten:
Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie de pasos, la Técnica histológicaPASOS DE LA TECNICA:
1- Obtención del material:
Pueden provenir de:
* biopsias quirúrgicas
* material obtenido de necropsias
* utilizando animales de laboratorio
* estudios experimentales en animales
* material de cultivos de tejidos
* frotis o extendidos





2- Fijación:
Es el proceso Físico (Histoquímico) que logra una situación estable delos constituyentes tisulares, interrumpiendo las reacciones enzimáticas de autólisis.

Cualidades de un buen fijador:
1) Actuar con rapidez y detener los procesos autolíticos.
2) Buen poder de penetración.
3) Conservar lo mas fielmente la estructura del tejido.
4) No interferir y facilitar los procesos posteriores.
5) Endurecer el tejido y darle mayor consistencia.
6)Insolubilizar los componentes de los tejidos.
7) No producir estructuras artificiales.

Clasificación de los fijadores:
1- Fijadores químicos: son los más empleados y pueden ser:
a) Simples: constituido por una sola sustancia:
Formol al 10%: Es muy usado.
Aldehído glutárico o glutaraldehido
Acetona en frío.
b) Compuestos o mezclas fijadoras: constituidas por variassustancias.
Liquido de Flemming: (mezcla cromo-osmio-acética) para estudios citológicos.
Liquido de Bouin: (mezcla picro-formol-acética). El mejor fijador para los trabajos corrientes. Muy penetrante.
2- Fijadores físicos:
Desecación:
Calor seco:
Calor húmedo:
Frío:
Congelación y desecación: (Método de Altmann-Gersh)

Mecanismo de acción de los fijadores:
a) Porcoagulación de las proteínas, sin combinarse con ellas: alcohol, formol, ácido Pícrico, etc.
b) Formando combinaciones químicas con las sustancias orgánicas: ácido crómico, bicromato de potasio, de amoniaco, etc.
c) Por reducción, al contacto con las sustancias orgánicas formando un precipitado fino: ácido ósmico, bicloruro de mercurio.
d) Por oxidación: bicromato de potasio.
3- InclusiónEs impregnar la pieza con una sustancia que le confiere dureza y permite obtener cortes uniformes y delgados.
En la técnica corriente, se utiliza la parafina; que es insoluble en agua, está condicionada por la extracción de toda el agua del material a incluir. Los pasos de la inclusión son los siguientes:


c) Impregnación en parafina:
Es la inclusión propiamente dicha.

c)Confección del taco: Es la inclusión definitiva del trozo de tejido. Se utiliza un molde metálico especial denominado barras de Leuckart, donde se vierte parafina liquida (60°C).
4- Obtención del corte:
Para obtener cortes finos se utilizan aparatos denominados micrótomos, hay varios tipos.

Tipo Minot: (Mas Usados) dispone de 4 posiciones de ajuste, según el corte sea de 1-10 µm, 11-20 µm, 21-30µm o 31-40 µm así como ajuste del ángulo de la cuchilla graduado, inmovilización de la rueda y mecanismo de avance de gran precisión

Montaje del corte:
Se colocan sobre una platina con agua caliente. Luego se levantan los cortes con un portaobjeto, se extiende sobre una película de Albúmina de Mayer, que es una mezcla de partes iguales de albúmina de huevo, glicerina con un cristal de...