Laboratorio De Suelo

INTRODUCCIÓN

- En éste práctico se realizarán pruebas bioquímicas básicas, aplicables a la mayoría de los suelos, para determinar cuantitativamente la biodiversidad de este hábitat y algunas de las principales actividades de los diferentes grupos fisiológicos que intervienen en los ciclos del carbono y del nitrógeno.

El suelo es la parte superficial de la corteza terrestre, sonbiológicamente activos y ocurren varios tipos de procesos químicos, físicos y biológicos que se reflejan en la gran cantidad de suelos que ocupan nuestro planeta.

La instalación de los seres vivos en esta capa, como bacterias, algas, hongos y protozoos, es la fase más significativa para la formación de suelo ya que con sus procesos vitales y metabólicos, en los cuales se mineraliza la materia orgánicaconvirtiéndola en nutrientes asimilables por las plantas y transformando compuestos de importancia geológica y ambiental.

MATERIALES

1. Muestra de suelo.
2. 1 matraz con 90 ml de agua destilada estéril.
3. 1 bolsa estéril con filtro.
4. 9 tubos con 9 ml de agua destilada estéril.
5. 6 placas con agar extracto de tierra.
6. 24 tubos con medio de gelatina.
7. 24 tuboscon medio de Asparragina.
8. 18 tubos con medio de sulfato amónico.
9. 24 tubos con medio de almidón.
10. 12 tubos con medio de celulosa.
11. Estufa de incubación 28 ± 2ºC.
12. Pipetas de 1 ml estériles.
13. Reactivo Nessler.
14. Reactivo de difenilamina sulfúrica.

PROCEDIMIENTO

1. Preparación de las diluciones:

1. Pesar 10 gr de suelo tamizado yhomogenizado.
2. Añadir 90 ml de agua destilada estéril y triturar en una bolsa estéril con filtro en un “Stomacher” durante 1 minuto.
3. Recoger el filtrado en un matraz estéril (si fuera necesario filtrar por papel de filtro estéril). Así se obtiene la dilución 10-1.
4. Para obtener las siguientes diluciones, agitar vigorosamente el matraz y tomar 1 ml de la dilución 10-1 y transferirlo a untubo con 9 ml de agua destilada estéril. Así se obtiene la dilución 10-2.
5. Seguir la misma técnica cambiando la pipeta en cada caso, preparando a partir de cada dilución hasta llegar a 10-10.

2. Siembra en medio sólido:

1. Sembrar 0,1 ml de las disoluciones 10-5 a 10-7, 2 placas de agar extracto de tierra por cada dilución.
2. Incubar en una estufa a 28ºC en ambiente húmedo.3. A los 5 días verificar resultados.

CICLO DEL NITRÓGENO.
3. Recuento de microorganismos proteolíticos:
1. Sembrar las disoluciones 10-3 a 10-10 a razón de 1 ml por tubo y 3 tubos por cada dilución, en un medio que contiene gelatina como fuentes de proteínas.
2. Incubar a 28ºC durante 15 días y observar diariamente.

4. Recuento de microorganismos amonificantes:
1.Sembrar las disoluciones 10-2 a 10-9 a razón de 1 ml en cada tubo y 3 tubos por cada dilución, en un medio liquido que contiene asparragina como fuente de carbono y nitrógeno.
2. Incubar en una estufa a 28ºC durante 15 días.
3. Verificar resultados a los 15 días.

5. Recuento de microorganismos nitrificantes:
1. Sembrar las disoluciones 10-1 a 10-6 a razón de 1 ml en cada tubo y 3tubos por dilución, en un medio que contiene sulfato amónico que las bacterias nitrosas deberán transformar en nitritos.
2. Incubar a 28ºC durante 15 días.
3. Verificar resultados a los 16 días de cultivo.

CICLO DEL CARBONO:
6. Recuento de microorganismos amilolíticos:
1. Sembrar 1 ml de las disoluciones 10-3 a 10-10 y 3 tubos para cada dilución, en un medio liquido que contengacomo fuente de carbono almidón.
2. Incubar a 28ºC durante 15 días.

7. Recuento de microorganismos celulolíticos:
1. Sembrar las disoluciones 10-1 a 10-4 a razón de 1 ml por tubo y 3 tubos por cada dilución y cada tubo contendrá una tira de papel filtro.
2. Incubar a 28ºC por 15 días.

RESULTADOS
1. Siembra en medio sólido: Luego de verificar los resultados se procedió al...