Laboratorio Microbiología

TINCIÓN DE GRAM.
La Tinción de Gram es una técnica de tinción diferencial que permite clasificar las bacterias en Gram positivas y Gram negativas, según el tipo de coloración que adquieran.
La diferencia entre las bacterias grampositivas y gramnegativas se debe a la naturaleza física de sus paredes celulares. Si se elimina la pared celular de las bacterias grampositivas estas se tiñen comogramnegativas. Además, las bacterias genéticamente sin pared celular como los micoplasmas se tiñen también como gramnegativas. El peptidoglicano en sí mismo no se tiñe; en vez de ello parece que el peptidoglicano actuaría como una barrera de permeabilidad evitando la pérdida del cristal violeta. Durante el procedimiento de Gram, las bacterias se tiñen primero con cristal violeta y después setratan con yodo para promover la retención del colorante. Cuando, a continuación, las bacterias grampositivas se tratan con etanol, se cree que el alcohol contrae los poros del grueso peptidoglicano. En consecuencia, el complejo colorante-yodo queda retenido durante este corto paso de decoloración y las bacterias permanecen moradas. Por el contrario, el peptidoglicano gramnegativo es muy fino, nopresenta tanto entrecruzamiento y contiene poros más grandes, por estas razones el alcohol elimina más fácilmente el complejo yodo-cristal violeta de las bacterias gramnegativas. Por ello, después, las bacterias gramnegativas se tiñen fácilmente de rojo o rosa por la tinción de contraste con fuchsina básica diluida.
Material:-Portaobjetos
-Asa de platino
-Pinzas de portaobjetos
-Mechero
-Microscopio
-Aceite de inmersión
Microorganismos problema:
-E.coli
-Micrococcus luteus
-Staphylococcus aureus

CULTIVO EN JARRA DE ANAEROBIOS.

La importancia del oxígeno para el crecimiento de un organismo está directamente relacionada con su metabolismo; en particular, con los procesosque emplea para conservar la energía obtenida de su fuente energética.
Un organismo capaz de crecer en presencia de oxígeno atmosférico es un aerobio, mientras que uno que puede crecer en su ausencia es un anaerobio. Casi todos los organismos multicelulares son completamente dependientes del oxígeno atmosférico para su crecimiento; es decir, son aerobios estrictos u obligados.
Los anaerobiosfacultativos no necesitan oxígeno para su crecimiento pero crecen mejor en su presencia; en presencia de oxígeno usan la respiración aerobia. Por otro lado, los anaerobios estrictos u obligados no toleran el oxígeno y mueren en su presencia. Muchos microorganismos poseen enzimas que proporcionan protección frente a los productos tóxicos del oxígeno. Los aerobios estrictos y los anaerobiosfacultativos generalmente contienen las enzimas superóxido dismutasa(SOD) y catalasa, que catalizan la destrucción del radical superóxido y del peróxido de hidrógeno, respectivamente.
La mayoría de infecciones está causada por aerobios. Hay que sospechar de anaerobios cuando una persona es operada y a pesar del tratamiento antibiótico la fiebre persiste y hay pus; además estas infecciones suelen ser¨polimicrobianas¨, por lo que el tratamiento es complicado.
Material:
-Cultivo de 24horas en caldo nutritivo de Staphylococcus aureus o Staphylococcus simulans y Streptococcus pyogenes
-Agar sangre
-Asa de platino
-Jarra de anaerobiosis





PRUEBA DE LA HEMOLISIS.

Observar la placa de agar sangre al trasluz y comprobar la existencia o no de hemólisis, así como su posibleclasificación.
La cepa que esta fuera de la Jarra de Anaerobiosis produce menos hemólisis (hemólisis alfa) que la cepa que está dentro. Hay que observar la producción de hemolisis, hay 3 tipos:
-Alfa: hemólisis parcial
-Beta: hemólisis completa
-Gamma: no hemólisis
Los Streptococcus incubados en anaerobiosis producen una hemólisis beta. En el Staphilococcus se produce una hemólisis parcial alfa....