lic. ciencias de la comunicacion

Fluorescencia | Microscopía Fluorescente
PALABRAS CLAVE: Fluorofóro, epí-fluorescencia, filtros fluorescentes, confocal, GFP, PA-GFF, Kaede, puntos cuánticos, imagen espectral, FLIM, FRAP, FLIM,FLIP, TIRF, pinzas láser, imagen multidimensional, episcópica, diascópica, resolución, cociente señal a ruido, tecnología “eliminador de ruido”
DEFINICIÓN: La fluorescencia es el fenómeno donde laabsorción de luz de una longitud de onda dada por una molécula es seguida por la emisión a longitudes de onda más largas (visible).
TECNOLOGÍA: La imagen fluorescente usa iluminación de altaintensidad para excitar moléculas fluorescentes en la muestra. Cuando una molécula absorbe fotones, los electrones son excitados a un nivel de energía más alto. Conforme los electrones se “relejan” a su estadocero, se pierde la energía vibracional y, como resultado, el espectro de emisión se mueve a longitudes de onda más largas.
La fluorescencia que emana desde la muestra (y no la luz iluminante). Enlos microscopios de epí-fluorescencia, el objetivo enfoca tanto la luz de excitación como colecta la luz que regresa al ocular o detector. La fluorescencia se separa de la lul de excitación por unespejo dicroico y los filtros apropiados: la luz de excitación se refleja de regreso dentro del objetivo mientras que se transmite la fluorescencia. Los filtros, excluyendo y/o transmitiendo longitudes deonda de luz seleccionadas, optimiza fluorescencia y reduce el “ruido de fondo” no deseado.
Varias sustancias autofluorescen y esto has sido explotado especialmente en botánica, petrología, y laindustria de semiconductores. Los fluoróforos disponibles comercialmente, con espectros de excitación y emisión bien definidos, se pueden usar para “manchar” estructuras específicas o moléculas en unespécimen. La elección juiciosa de fluoróforos permiten la identificación de varios objetivos mientras que los espectros de emisión se pueden separar limpiamente y distinguirse de la autofluorescencia....