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DESARROLLO DE ACTIVIDADES:

- Conocimiento de la seguridad en el laboratorio así como el manejo del material y aparatos utilizados en el laboratorio de bioquímica y genética microbiana.

Lavadoy esterilización de material limpio y contaminado.
Uso de aparatos como: balanza granataria, analítica, peachimetro, centrifuga, refrigerada, microscopio, estufas de incubación yespectrofotómetro.
Preparación de soluciones en peso, volumen, concentración (moralidad y normalidad.)
Preparación de medios de cultivo LB, MD, K Lactato, Rojo congo, M9.
Cultivo de cepas en medios semisólidos yliquido.
Extracción de DNA plasmídico.
Preparación de gel de agarosa.
Obtención de extracto crudo.
Preparación de gel de acrilamida.
Determinación de la actividad enzimática (OASS)
Determinación deproteínas.

SOLUCIONES DE ACTIVIDAD ENZIMATICA B- GLUCURONIDASA:

SOLUCIONES DE PERMEABILIZACION:

100 Mm de fosfato de Sodio bibásico Na2HPO4 PM=268.77.
20Mm KCl.
2Mm MgSO4
.8 mg – ml CTBBEN USO.
.4 mg – ml de B – mercaploetanol – en uso.
5.4 Ml – ml de B – mercaploetanol - en uso.

100 Mm

gr= (PM) (M) (L) = (268.077) (0.1) (0.025)=0.0372 g

MgSO4 2 Mm

gr=(PM)(M)(L)= (246.48)(0.002)(0.025)=0.0123

CTAB
0.8 mg/ml

.8mg-1ml
-1.5 ml

X=1.2mg=0.0012g
Solución Perm=250 ml- 1.35 ml β- mercaptoetanol

Soluciones para Actividad enzimáticaSolución sustrato


Na2HPO4 60 mM
NaH2PO4 40 mM


1mg- 1ml sustrato
2.7 µl-1ml β-mercaptoetanol


Na2HPO4

gr= (PM)(M)(L)= (268.67)(0.06)(0.025)= 0.462 g


NaH2PO4

gr=(PM)(M)(L)= (137099)(0.04)(0.625)=0.137 g

1mg-1ml
2mg-2ml
Pesar 0.002 g de sustrato

*SOLUCION STOP

1M Carbonato de sodio (Na2CO3) PM=105.99 (25 ml)


g= (PM) (M) (L)=(105.99)(1)(0.025)=2.64 g
















TECNICA DE MOVILIDAD


Sembrar en caja de RC la cepa deseada e incubar 72 hrs a 30°C con atmósfera húmeda
Tomar de 3-5 colonias de la...