Mètodos Para Estudiar El Dna
Páginas: 16 (3910 palabras)
Publicado: 28 de noviembre de 2012
Métodos para estudiar el DNA
Objetivo: Conocer los principales métodos para manipular experimentalmente el DNA de las células.
La tecnología recombinantedel DNA , fundamentada en nuevos métodos para estudiar la más importante de las biomoléculas, nació a principios de los años setenta. Esta área de experimentación sólo podía abordarse de una manera indirecta, a través del análisis de laexpresión fenotípica de los genes. Hoy en día es posible separar una región específica del DNA, sacarle un número ilimitado de copias y determinar su secuencia a una velocidad de cientos de nucleótidos por día. Incluso, un gen aislado puede ser rediseñado (mutagénesis de sitio específico) y transferido a un gameto de un animal o planta para hacerlo parte funcional y heredable del genoma de esteorganismo (transgénesis). Así, esta tecnología ha producido un fuerte impacto en todos los aspectos de la biología celular al proporcionarle poderosos medios para analizar y cambiar genes y proteínas.
La llamada tecnología recombinante del DNA, comprende una variedad de técnicas, siendo las más importantes las siguientes:
1. Fragmentación del DNA.
2. Secuenciación de nucleótidos.
3. Hibridizaciónde ácidos nucleicos.
4. Amplificación del DNA por la técnica de PCR.
5. Clonación del DNA.
6. Ingeniería del DNA (transgénesis).
1. FRAGMENTACION DEL DNA.
Las enzimas de restricción, también llamadas endonucleasas de restricción, reconocen secuencias específicas en el DNA de doble hélice y cortan ambas hebras en lugares concretos. Estas enzimas pueden ser consideradas bisturíes de granprecisión. Son indispensables para analizar la estructura de los cromosomas, secuenciar fragmentos muy largos de DNA, aislar genes y crear nuevas moléculas de DNA que puedan ser clonadas. Estas enzimas pueden ser aisladas de un gran número de bacterias. Su función biológica consiste en destruir moléculas de DNA extraño. Muchas de estas nucleasas reconocen una secuencia específica de entre cuatro aocho nucleótidos en el DNA. Estas secuencias en el DNA propio de la célula no se degradan porque los centros que reconocen sus propias enzimas (residuos de A o C) están metilados. Se conocen más de 500 diferentes endonucleasas, muchas de las cuales reconocen diferentes secuencias de nucleótidos y están en la actualidad disponibles de manera comercial. Se nombran con una abreviatura de tres letras quese refiere al organismo productor (v.g. Eco de E. coli, ó Hin de Haemophilus influenzae).
Algunas nucleasas de restricción generan extremos romos y otras dejan, en los extremos liberados por el corte, pequeñas prolongaciones en el extremo 5, o en el 3,. A estas prolongaciones de cadena sencilla se les conoce como extremos "cohesivos" o "pegajosos" ya que tienen una afinidad específica entre sí(son complementarios). Los extremos cohesivos generados por una misma enzima de restricción (o con otra nucleasa que produzca los mismos extremos cohesivos), sin importar el origen del DNA, pueden ser fácilmente unidos, lo que produce moléculas híbridas o recombinantes.
Las enzimas de restricción cortan una molécula de DNA extraída de una célula, en una serie de fragmentos específicos conocidoscomo fragmentos de restricción, que se pueden analizar y manipular con más facilidad que la molécula original. El conjunto de fragmentos de DNA, obtenidos después del tratamiento con una combinación de enzimas de restricción, pueden servir como una huella digital de una molécula de DNA (mapa de restricción).
Se pueden detectar fácilmente pequeñas diferencias entre moléculas similares de DNAseparando sus fragmentos por electroforesis en gel. Se utilizan geles de poliacrilamida para separar fragmentos de hasta unos mil pares de bases, y geles de agarosa, para resolver mezclas de fragmentos mayores (de hasta unas 20 kb). Las bandas de DNA en los geles de agarosa o poliacrilamida son invisibles a menos que el DNA sea marcado o teñido por algún método. Un método sensitivo de teñir el DNA es...
Objetivo: Conocer los principales métodos para manipular experimentalmente el DNA de las células.
La tecnología recombinantedel DNA , fundamentada en nuevos métodos para estudiar la más importante de las biomoléculas, nació a principios de los años setenta. Esta área de experimentación sólo podía abordarse de una manera indirecta, a través del análisis de laexpresión fenotípica de los genes. Hoy en día es posible separar una región específica del DNA, sacarle un número ilimitado de copias y determinar su secuencia a una velocidad de cientos de nucleótidos por día. Incluso, un gen aislado puede ser rediseñado (mutagénesis de sitio específico) y transferido a un gameto de un animal o planta para hacerlo parte funcional y heredable del genoma de esteorganismo (transgénesis). Así, esta tecnología ha producido un fuerte impacto en todos los aspectos de la biología celular al proporcionarle poderosos medios para analizar y cambiar genes y proteínas.
La llamada tecnología recombinante del DNA, comprende una variedad de técnicas, siendo las más importantes las siguientes:
1. Fragmentación del DNA.
2. Secuenciación de nucleótidos.
3. Hibridizaciónde ácidos nucleicos.
4. Amplificación del DNA por la técnica de PCR.
5. Clonación del DNA.
6. Ingeniería del DNA (transgénesis).
1. FRAGMENTACION DEL DNA.
Las enzimas de restricción, también llamadas endonucleasas de restricción, reconocen secuencias específicas en el DNA de doble hélice y cortan ambas hebras en lugares concretos. Estas enzimas pueden ser consideradas bisturíes de granprecisión. Son indispensables para analizar la estructura de los cromosomas, secuenciar fragmentos muy largos de DNA, aislar genes y crear nuevas moléculas de DNA que puedan ser clonadas. Estas enzimas pueden ser aisladas de un gran número de bacterias. Su función biológica consiste en destruir moléculas de DNA extraño. Muchas de estas nucleasas reconocen una secuencia específica de entre cuatro aocho nucleótidos en el DNA. Estas secuencias en el DNA propio de la célula no se degradan porque los centros que reconocen sus propias enzimas (residuos de A o C) están metilados. Se conocen más de 500 diferentes endonucleasas, muchas de las cuales reconocen diferentes secuencias de nucleótidos y están en la actualidad disponibles de manera comercial. Se nombran con una abreviatura de tres letras quese refiere al organismo productor (v.g. Eco de E. coli, ó Hin de Haemophilus influenzae).
Algunas nucleasas de restricción generan extremos romos y otras dejan, en los extremos liberados por el corte, pequeñas prolongaciones en el extremo 5, o en el 3,. A estas prolongaciones de cadena sencilla se les conoce como extremos "cohesivos" o "pegajosos" ya que tienen una afinidad específica entre sí(son complementarios). Los extremos cohesivos generados por una misma enzima de restricción (o con otra nucleasa que produzca los mismos extremos cohesivos), sin importar el origen del DNA, pueden ser fácilmente unidos, lo que produce moléculas híbridas o recombinantes.
Las enzimas de restricción cortan una molécula de DNA extraída de una célula, en una serie de fragmentos específicos conocidoscomo fragmentos de restricción, que se pueden analizar y manipular con más facilidad que la molécula original. El conjunto de fragmentos de DNA, obtenidos después del tratamiento con una combinación de enzimas de restricción, pueden servir como una huella digital de una molécula de DNA (mapa de restricción).
Se pueden detectar fácilmente pequeñas diferencias entre moléculas similares de DNAseparando sus fragmentos por electroforesis en gel. Se utilizan geles de poliacrilamida para separar fragmentos de hasta unos mil pares de bases, y geles de agarosa, para resolver mezclas de fragmentos mayores (de hasta unas 20 kb). Las bandas de DNA en los geles de agarosa o poliacrilamida son invisibles a menos que el DNA sea marcado o teñido por algún método. Un método sensitivo de teñir el DNA es...
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