Método de extracción de adn genómico en hojas de guayaba (psidum guajava), fácil, rápido y eficiente para amplificar rapd

MÉTODO RÁPIDO Y EFICIENTE PARA EXTRACCIÓN DE ADN GENÓMICO DE GUAYABA (PSIDIUM GUAJAVA) CON CTAB MODIFICADO

Muñoz-Rodríguez P.J.

Palabras clave
Compuestos fenólicos, ADN genómico, Psidium guajava, CTAB
RESUMEN
Actualmente existen diferentes técnicas especiales para extraer ADN en suficiente cantidad y calidad de hojas de guayaba, frescas o congeladas, sin la utilización de un sistemacomercial. En este trabajo se evaluaron dos protocolos diferentes que permitan extraer ADN genómico de hojas frescas o congeladas de guayaba mediante el método de CTAB modificado que resulte fácil, rápido, económico y eficiente para obtener un ADN de buena calidad y cantidad, libre de compuestos fenólicos, toxinas y contaminantes que en cierto modo afectan en la Reacción de Cadena Polimerasa (PCR) yAmplificación Aleatoria de ADN Polimórfico (RAPD). Las principales modificaciones radican en la manipulación del tejido antes y después de la molienda con nitrógeno líquido, para evitar la oxidación del tejido, y la reducción del tiempo en las incubaciones con calor y frio. La electroforesis en gel mostró que el ADN extraído con los dos métodos es efectivo, ya que se obtiene suficiente cantidad ycalidad de ADN para su manipulación. Aún así con el método rápido se obtuvo menor cantidad de ADN pero se extrajo en menor tiempo.

INTRODUCCIÓN
El primer paso para identificación y caracterización de una especie es la extracción del material genético, el cual, debe de estar lo suficientemente puro para su manipulación, fraccionamiento, amplificación y secuenciación (Feria, 2008).Actualmente existen diferentes sistemas comerciales que permiten la extracción del ADN a partir del material vegetal, sin embargo no hay que descartar el uso de técnicas especiales que se han desarrollado con el fin de disminuir la interferencia que pudiera presentarse por un alto contenido de compuestos fenólicos, polisacáridos o mucopolisacáridos en la muestra que disminuyen su pureza y rendimiento(Dehestani and Kazemi, 2007 y Friar, 2005).
Los compuestos fenólicos en plantas se localizan comúnmente en plantas aromáticas con uno o más grupos hidroxilo. Estos componentes tienden a ser solubles en agua, se combinan con glucósidos, azúcares, y ocasionalmente con proteínas, alcaloides y terpenoides (Cázares et al., 2010). Específicamente en las hojas de guayaba estos compuestos han sido detectadosen forma de ácido gálico (12.18 mg/g), ácido ferúlico (9.42 mg/g), ácido protocatecuico, ácido clorognénico, ácido psidólico, ácido cafeico. Además las hojas contienen flavonoides (2610 mg/kg en hojas maduras) como quercetina (12.26 mg/g). (Gutiérrez et al., 2000). Además podemos encontrar otros compuestos en las hojas de guayaba, por ejemplo ácidos grasos esenciales, carbohidratos, amonoácidos,proteínas y esteroides. (Rodríguez et al., 1997). Uno de los principales problemas en la extracción de ADN en plantas es la presencia de compuestos fenólicos, carbohidratos y proteínas mismas que pueden asociarse durante el proceso de extracción. La eliminación de estos compuestos es necesaria para la extracción ADN ya que pueden afectar la Reacción de Cadena de Polimerasa (PCR) y la AmplificaciónAleatoria de ADN Polímórfico (RAPD). La mayoría de los protocolos convencionales de extracción de ADN (método de CTAB) son efectivos para extraer ADN de cualquier tipo de tejido vegetal; sin embargo, es necesario, y debido al tipo de tejido y propiedades química del mismo, realizar modificaciones a las concentraciones de los reactivos (TrisHCl, EDTA, CTAB, NaCl, PVP40 y β-mercaptoethanol) o usode químicos caros y de difícil acceso (K2HPO4x3H2O ó K2PO4), aumentar el tiempo en la exposición al frio o calor (incubación a 65° C y incubación a -4°C). Con todo y estos cambios la duración de una extracción desde el macerado hasta la precipitación de ADN varía entre 6 y 8 horas de práctica. El propósito de este trabajo es extraer ADN genómico de hojas frescas o congeladas de guayaba mediante...