Extraccion de adn genomico

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PRACTICA # 2
NOMBRE: EXTRACCION DE ADN GENOMICO

INTRODUCCION

La extracción del ADN es el primer paso para el posterior análisis de este, existen muchos métodos para la extracción de ADN deacuerdo al tipo celular que lo posea, ya sean plantas, animales o bacterias. Medios mecánicos como el vortex y la centrifugación son indispensables para procesos como precipitación del ADN y lisiscelular. Para limpiar la solución resultante se utilizan reactivos detergentes y sufractantes que debido a su conformación interaccionan con los componentes membranales y las soluciones, lo quepermite al final del protocolo obtener un ADN de calidad para procesos posteriores como la Reacción en Cadena de la Polimerasa, PCR.

OBJETIVOS

- Familiarizar al estudiante con protocolos deextracción de ADN en plantas, animales y de bacterias.
- Comprender las diferencias en los protocolos de acuerdo al tejido y al organismo en cuestión.
- Identificar la función de los diferentereactivos y soluciones usados en los diferentes protocolos.

METODOLOGIA

PROTOCOLO PARA EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE SANGRE (MÉTODO DE SALTING OUT MODIFICADO PARA MICROEXTRACCIÓN)

1. Tomarentre 0.2 y 0.5 ml de sangre total y agregarlos en 0.5 ml de Solución de Lisis I en un tubo Eppendorf.
2. Mezclar por Inversión e incubar a temperatura ambiente por 5 minutos.
3. Centrifugara 14000 RPM x 1 minuto.
4. Voltear el tubo suavemente para descartar el sobrenadante y evitar que se salga el precipitado. Escurrir en una servilleta limpia.
5. Adicional 1 ml de Solución deLisis I y mezclar por inversión. Hacer vortex hasta desbaratar lo más posible el pellet o utilizar una punta aerosol resistente para desbaratar el mismo. Evite formar espuma.
6. Centrifugar a14000 RPM x 1 minuto. Descarte el sobrenadante.
7. Repetir los pasos 5 y 6 hasta lograr un pellet (Precipitado) de color totalmente blanco o transparente (2 o 3 veces mas).
8. Agregar al...
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