Métodos de análisis de glucosa y fenol

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE COAHUILA
ESCUELA DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
UNIDAD TORREÓN


BIOQUÍMICA MICROBIANA





PRÁCTICA #12
MÉTODOS DE ANALISIS DE GLUCOSA Y DE FENOL




MAESTRO DE LA MATERIA:
DR. NAGAMANI BALAGURUSAMY



EQUIPO #7



12 DE MAYO DE 2013
TORREÓN, COAH.

Introducción
Se le llama metabolismo al conjunto de reacciones químicas que soncatalizadas por medio de enzimas reguladas que tienen lugar en las células. Se divide en catabolismo y anabolismo.
Por otro lado, el cometabolismo es un mecanismo para la degradación de compuestos tóxicos. En este proceso, alguna enzima en una ruta, puede degradar el tóxico sin intención debido a la similitud con la enzima.
Métodos de análisis.
Glucosa.
El método DNS, es una técnicacolorimétrica mediante el ácido dinitrosaliciílico para la hidrólisis de polisacáridos que se encuentran en una muestra. Sirve para cuantificar los azúcares reductores formados durante una fermentación o para cuantificar los productos de una reacción enzimática.
El DNS reacciona únicamente con los azúcares reductores. Los azúcares reductores tienen un grupo aldehído, cetona, hemicetal o hemiacetal, pudiendoreducir a un agente oxidante. Por ejemplo, la sacarosa es un disacárido no reductor, pero al hidrolizarse en medio ácido se liberan glucosa y fructosa que sí son reductores y reaccionan con el DNS formando un producto coloreado. A mayor coloración, mayor es la concentración del azúcar.
Fenol.
Este método analiza los compuestos orgánicos que presenten anillos aromáticos hidroxilados, tales comofenol, ácido tánico, ácidos húmicos, proteínas, etc.
Los compuestos fenólicos reaccionan con el reactivo de Folin-Ciocalteu (tungstofosfato y molibdofosfato) en cóndiciones de pH básicas, haciendose presente una coloración azul, y haciendose una lectura espectrofotométrica a 700 nm.

Procedimiento experimental
1) Lo primero que hicimos fue preparar los 3 diferentes medio de cultivo. Los tresmedios se realizaron para todos los equipos y se prepararon de la siguiente forma.

Preparación para Caldo nutritivo con glucosa (100 ml)
Preparación para Caldo nutritivo con fenol (100 ml)
Preparación para Caldo nutritivo con glucosa y fenol (100 ml)
2.3 gr de caldo
0.5 gr de glucosa
2.3 gr de caldo
0.1 gr de fenol
0.2 gr de sulfato de amonio
0.1 gr cloruro de magnesio
0.1 gr fosfato diacido de potasio
0.1 gr fosfato mono acido de potasio

2.3 gr de caldo
0.5 gr de glucosa
0.1 gr de fenol

2) Preparada la debida cantidad de cada medio con una pipeta pasamos 2 ml de cada medio a un tubo de ensaye. Los rotulamos y metimos a esterilizar.
3) Terminada la esterilización, guardamos la medios en una gaveta hasta el día siguiente
4) Preparamos un pre inoculo en caldo nutritivode nuestra cepa. Una vez inoculado dejamos incubar durante 24 horas
5) Pasadas las 24 horas nuestra cepa no presento crecimiento, por lo que dejamos incubar 24 horas más.
6) Pasadas las 48 horas nuestra cepa presento crecimiento, por lo que se procedió a inocular en los 3 medios preparados con anterioridad. Una vez inoculados los medios, dejamos incubando hasta esperar un crecimiento notable7) Alcanzado el crecimiento deseado pasamos a las centrifugaciones.
En 6 tubos de eppendorf, colocamos 1 ml de muestra de cada medio, utilizando dos tubos eppendorf para cada tubo de ensaye.
8) Centrifugamos a 10000 RPM durante 20 minutos
9) Terminado el proceso de centrifugación, pasamos el sobrenadante de los tubos de eppendorf a 3 tubos de eppendorf limpios. (cada 2 tubos correspondientes asu medio) terminando con 3 tubos de eppendorf, estos los guardamos en el refrigerador
10) Con el residuo agregamos 1 ml de agua destilada, y volvimos a centrifugar a 10000 RPM por 20 minutos.
11) Terminada la segunda centrifugación, pusimos los tubos de eppendorf en un baño maría durante 15 minutos.
12) Pasados los 15 minutos del baño maría, pasamos a centrifugar a 10000 RPM por 20 minutos....