METODO FENOL-SULFURICO

Método de fenol-sulfúrico
Este método propuesto por Dubois et al en 1956 se fundamenta en que los carbohidratos son particularmente sensible a ácidos fuertes y altas temperaturas. Bajo estascondiciones una serie de reacciones complejas toman lugar empezando con una deshidratación simple, si se continúa el calentamiento y la catálisis ácida se producen varios derivados del furano que condensanconsigo mismos y con otros subproductos para producir compuestos coloridos producto de la condensación de compuestos fenólicos y con heterociclos con el nitrógeno como heteroátomo. La condensación máscomún es con fenol. Este método es fácil, eficaz y rápido. Todos los azúcares como oligosacáridos y polisacáridos pueden ser determinados, recordando que éstos bajo hidrólisis ácida producenmonosacáridos. La forma en que procede la reacción no es estequiométrica y depende de la estructura del azúcar, por lo tanto se realiza una curva patrón. (Nielsen, 1998)
ÁCIDO FENOL SULFÚRICO
–EL AZÚCAR SETORNA PRINCIPALMENTE
HIDROXIMETILFURFURAL (HMF) O FURFURAL (F)
LOS CUALES SON REALMENTE DETERMINADOS
LEYENDO LA ABSORBANCIA A 490nm H 2SO4
CONC. FENOL + CARBOHIDRATO → AMARILLO – NARANJA CALORH+ H+
• POLISACÁRIDOS → MONOSACÁRIDOS → F + HMF
∆ ∆VENTAJAS DEL MÉTODO
•ES SENCILLO
•ES RÁPIDO
•SENSIBLE A MUY BAJOS NIVELES DE AZÚCAR (E.G. 5 Μg)
•ESPECÍFICO PARA CARBOHIDRATOS.
•NO EXISTE INTERFERENCIA CON PROTEÍNAS
•
A MENUDO NO ESNECESARIA LA
CLARIFICACIÓN DE LA MUESTRA
•LOS REACTIVOS SON BARATOS Y ESTABLES
•COLOR ESTABLE
•RESULTADOS REPRODUCIBLES
•RESULTADOS CONFIABLES
DESVENTAJAS DEL MÉTODO
•LOS CARBOHIDRATOS QUE NOPROPORCIONAN HMF Y F EN LA DESCOMPOSICIÓN ÁCIDA RESULTAN EN UNA AMPLIA GAMA DE COLORES. POR TANTO EL MÉTODO NO MIDE TODOS LOS CARBOHIDRATOS
•MIDE LA MAYORÍA DE LOS CARBOHIDRATOS PERO LA INTENSIDAD DEL...